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制胶时，分离胶做好后加水压平，一般20min就凝固了。
这里有个技巧，已经在某个帖子里回答别人了。为了避免样品漏的问题，可在分离胶凝固后（表现为分层处出现一条清晰的分界线），这时候，可以不急着把水控干，而是配置积层胶，但是AP和TEMED先不加，再空出水（枪头沿一边吸尽即可），再在积层胶里加入AP,TEMED，迅速混匀，先取少量胶液灌入板内，轻轻摇晃几下，润一遍，弃掉这些胶液，这时候尽量去干净，动作要快。再正式灌满胶液，插上梳齿。
跑电泳时，可以60V先压约30min，可以看到溴酚蓝变的又细又直，待进入分离胶，可以看到预染的Marker已经分离，就可以将电压调至120V跑完。
转膜与普通的都一样，这里建议30V恒压转2小时(用于80KD以下的蛋白分子），如果有更大的蛋白280KD的mTor,可以再这2h后再加350mA 30min，效果很好，280KD以下90KD以上的都可以加350mA这一步，时间根据分子量来定。90KD加15min即可。
先写这些吧，有什么问题我们再讨论。希望对大家的实验有所帮助。
