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标题:【求助】真核表达一定要加kozak 序列吗?

qumm1985[使用道具]
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发表于 2013-7-31 14:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】真核表达一定要加kozak 序列吗?

真核表达一定要加kozak 序列吗?

我要做的基因没有kozak 序列.
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duoduo[使用道具]
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发表于 2013-7-31 14:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以不加。不过有的基因的表达对于kozak序列比较敏感，没有的这个序列的话可能表达量较低。
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tuomu45[使用道具]
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发表于 2013-7-31 14:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以自己在引物上设计kozak序列
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2013-7-31 14:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以自己在引物上设计kozak序列

=====================================

那是不是在起始密码子前又多了一个起始密码子?
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duoduo[使用道具]
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发表于 2013-7-31 14:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 qumm1985 于 2013-7-31 14:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
可以自己在引物上设计kozak序列

=====================================

那是不是在起始密码子前又多了一个起始密码子?

差不多就是这个意思
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2013-7-31 14:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 duoduo 于 2013-7-31 14:06 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


差不多就是这个意思

多了一个起始密码子,相当于融合了一小段肽,会不会对蛋白活性有影响?
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发表于 2013-7-31 14:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Kozak序列只是一个统计的结果，在真核表达系统中一般加上Kozak序列以提高转录和翻译的效率，没有说一定得有Kozak序列才能表达
我们做GST pull down，构建DNA聚合酶亚基。用原核表达系统，PCR在设计引物时5’端挂上Kozak序列，IPTG诱导BL21表达，WB检测一样好使
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发表于 2013-7-31 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不是再加一个起始密码子 而是在原基因序列上做改动 从引物上做突变
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发表于 2013-7-31 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般来说做真核表达加上KOZAK序列蛋白表达量会比较高。设基引物时，KOZAK序列是在启动子之前，酶切位点之后。其要求满足的条件可参照KOZAK序列的要求。
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junjie05[使用道具]
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发表于 2013-7-31 14:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做两个
表达量低 就加上
表达还可以 就不加了
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