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标题:【求助】关于IEF水化的问题

966735obeng[使用道具]
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发表于 2013-7-31 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于IEF水化的问题


在Bio-rad的IEF电泳仪水化程序设置中有"主动水化"和"被动水化"两种选择,请问,这两种方法有何区别?它们对样品的处理各有什么优点?
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2013-7-31 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

两种水化模式的区别在于

1. 主动水化反应是给胶条两端加上一个比较低的电压，促进样品进胶，一般伯乐的是 50V； 被动水化反应则是不加电压。

2. 主动水化过程可以促进大分子蛋白进入胶条， 但是同时会损失一部分小分子量蛋白

3. 一般温度（室温20度左右），采用被动水化；温度过低，为了避免样品在胶条表面析出，采用主动水化。（现在一般都是主动水化因为IEF都带自冷却系统，恒温17-20度， 所以还是用主动水化比较好）
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发表于 2013-7-31 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问我想得到小分子蛋白多肽多一点是不是采用被动水化好一点呢？
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standbyme[使用道具]
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发表于 2013-7-31 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问我这个是真么回事：


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966735obeng[使用道具]
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发表于 2013-7-31 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上样量不是一般的大。。。。。。而且还是银染。。。。。。
平常18cm的胶做银染，200ug的量就足够了
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standbyme[使用道具]
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发表于 2013-7-31 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我使用2000ug的上样量效果不好。3000ug以前也由效果好的。我现在怀疑蛋白定量标准品和银染出问题。谢谢
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wood533[使用道具]
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发表于 2013-7-31 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上样量绝对过大了 对于银染来说~

3mg的上样量可以做考染~

可能是定量时出问题
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发表于 2013-7-31 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议做考染，3mg做银染.....
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standbyme[使用道具]
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发表于 2013-7-31 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

问题现在发现了，可能是：1、样品处理不过关，2、上槽液使用了已经使用国的液体，3、聚焦时间不够，时间改为8万VH.。

[ 本帖最后由 standbyme 于 2013-7-31 15:26 编辑 ]


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avi317[使用道具]
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发表于 2013-7-31 15:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用伯乐7cm胶条做膜蛋白双向电泳，（样品用TCA/丙酮沉淀过）。做了几次酸性端都存在严重横纹，碱性聚焦较好，是否有好的聚焦程序，求帮助。附件中是图片。


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