【求助】Tris-Tricine-SDS-PAGE

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标题:【求助】Tris-Tricine-SDS-PAGE

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发表于 2013-7-31 17:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最近刚开始做Western blot，要做的蛋白分子量很小，还不到5KD，从园子里看到可以用Tris-Tricine-SDS-PAGE电泳，但不知Tris-Tricine-SDS-PAGE电泳的电泳仪需要特殊的吗？和普通SDS-PAGE电泳的电泳仪是否一样？
还有一个傻傻的问题，Tris-Tricine-SDS-PAGE电泳缓冲液配方里都说要分别配制阳极缓冲液和阴极缓冲液，但我盯着电泳仪看了半天也不知道阳极缓冲液和阴极缓冲液应该分别加在哪里？
请高手指教，不胜感激！

98776langtao[使用道具]
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发表于 2013-7-31 17:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

以前我在实验室作的Tris-Tricine-SDS-PAGE就是用普通SDS-PAGE电泳的电泳仪，我们用的是六一的电泳槽，胶灌好后，拔完梳子，然后将玻璃板和灌胶膜具之间用琼脂密封，然后将凝胶放入电泳槽内，凝胶里面加阴极缓冲液，外面加阳极

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发表于 2013-7-31 17:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

电泳仪不需要特殊的，其他的不知道，伯乐的不用琼脂糖封，和普通的sds-page相比，只是中间多了一个夹层胶，浓度一般为10%。内槽是阴极缓冲液，外槽是阳极缓冲液，注意内槽不要加得太满了。具体的缓冲液配方和电泳条件请搜索本版，有很多。

sunshine039[使用道具]
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发表于 2013-7-31 17:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

电泳仪不需要特殊的，其他的不知道，伯乐的不用琼脂糖封，和普通的sds-page相比，只是中间多了一个夹层胶，浓度一般为10%。内槽是阴极缓冲液，外槽是阳极缓冲液，注意内槽不要加得太满了。具体的缓冲液配方和电泳条件请搜索本版，有很多。

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为什么内槽不能加得太满呢，我都是加满跑的。这个tricine 胶把我折磨坏了，我的蛋白才4.5k

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发表于 2013-7-31 17:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

为什么内槽不能加得太满呢，我都是加满跑的。这个tricine 胶把我折磨坏了，我的蛋白才4.5k

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我发现有时候加得太满了，电流很小而电压很大
折磨坏了是什么意思？

sunshine039[使用道具]
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发表于 2013-7-31 17:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
头痛

============

我发现有时候加得太满了，电流很小而电压很大
折磨坏了是什么意思？

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我做的时候，是20mA三小时，开始的时候电压为50v, 结束的时候电压变成了120v。还有一个问题是，小分子的蛋白压不成带，很散。
折磨就是我做不好这个实验啊，高人能否指点一下。后续的转膜也是个问题，我想想就头疼。

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发表于 2013-7-31 17:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 sunshine039 于 2013-7-31 17:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

相关疾病：
头痛

============

我发现有时候加得太满了，电流很小而电压很大
折磨坏了是什么意思？

=================================================================================================

我做的时候 ...

建议浓缩胶10mA或30V，夹层胶和分离胶用20mA或100V
压不平是不是因为上样量过高，或者缓冲液PH值不准？包括凝胶缓冲液和阴极及阳极缓冲液。PH值不准的可能性比较大。

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发表于 2013-7-31 17:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Tris-Tricine-SDS-PAGE电泳的上样缓冲液用与SDS-PAGE电泳相同的可以吗？

楼上群友你用的哪种Marker呀，我一直没找到合适的Marker。

谢谢大家

ending[使用道具]
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发表于 2013-7-31 17:38 资料个人空间短消息加为好友

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QUOTE:

原帖由 mod=8048 于 2013-7-31 17:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
Tris-Tricine-SDS-PAGE电泳的上样缓冲液用与SDS-PAGE电泳相同的可以吗？

楼上群友你用的哪种Marker呀，我一直没找到合适的Marker。

谢谢大家

上样缓冲液可以一样
marker可以用上海生化所产的，博士德的，赛百盛的，这些都是比较便宜的，贵的你搜一搜旧帖。

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发表于 2013-7-31 17:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 ending 于 2013-7-31 17:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

上样缓冲液可以一样
marker可以用上海生化所产的，博士德的，赛百盛的，这些都是比较便宜的，贵的你搜一搜旧帖。

谢谢，我刚买到一个2-71kD的marker。

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