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不知道兄弟注意没有，（1）pET32a质粒上游就有Histag标签，就在多克隆位点的上游，介于Trx蛋白和多克隆位点之间，即使你的目的基因上有终止密码，蛋白翻译时也确实终止了，只是多克隆位点下游的Histag标签不会翻译，而上游的Histag标签也会翻译出来。因此，过柱时也会挂在Ni柱上啊。（2）过柱时不仅有Histag标签的蛋白可以结合Ni柱，其实很多杂蛋白也可以结合在Ni柱上，这就是为啥在做蛋白纯化时要模咪唑浓度的原因，但是一般的杂蛋白和Histag标签蛋白的结合能力不一样，因此可通过不同咪唑洗脱达到分离纯化蛋白的目的。（3）即使出现了你说的那种情况，我仔细看了下pET32a的图谱，如果通读了的话，最多比不通读时多20个左右的氨基酸，这在做PAGE时是不易区别出来的。个人见解，仅供参考，望多交流。
