【求助】P-ERK1/2--western blot的条件

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标题:【求助】P-ERK1/2--western blot的条件

douding66[使用道具]
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发表于 2013-8-3 09:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教各位大侠：我最近在做P44/42-ERK，分子量如此接近，怎样才能把两条目的条带分开？分离胶的浓度如何？我用的是湿转，电泳，转膜条件应该怎样？非常感谢！

8s5g[使用道具]
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发表于 2013-8-3 09:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

12％的胶恒压100V跑。
湿转恒流300ma转40min（六一电泳设备）。
下面是我们的抗体检测结果图(详见 cuturl('http://www.zkbiotech.com/products_show.asp?id=135'))

附件

2013-8-3 09:50

30616770.jpg (1.33 KB)

taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2013-8-3 09:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果是半干转bio-rad的不超过２５Ｖ的，ＥＲＫ的转膜条件是什么？

glass[使用道具]
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发表于 2013-8-3 09:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

12％的胶恒压100V跑。
湿转恒流300ma转40min（六一电泳设备）。
下面是我们的抗体检测结果图(详见 cuturl('http://www.zkbiotech.com/products_show.asp?id=135'))

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看你的结果真漂亮，我也作这个蛋白，我用的是湿转，BIO-RAD,用恒亚110，2小时，结果不是太好，我的转膜时间是不是太长？谢谢！

pengke1983[使用道具]
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发表于 2013-8-3 09:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主，这个不要担心跑不开，跑12％，10％胶，跑到酚绣蓝即将出来的时候，都是可以跑开的：）

pengke1983[使用道具]
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发表于 2013-8-3 09:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 taoshengyijiu 于 2013-8-3 09:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
如果是半干转bio-rad的不超过２５Ｖ的，ＥＲＫ的转膜条件是什么？

如果是半干转bio-rad的不超过２５Ｖ的，推荐使用20V,15-20MIN都是没有问题的，干转的效率很高，您可以放心