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标题:【求助】请教Westernblot条带中间细（甚至空）...

pencil菲[使用道具]
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发表于 2013-8-3 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请教Westernblot条带中间细（甚至空）...


请教Westernblot条带中间细（甚至空），而两头粗的原因可能有哪些？谢谢

大致

条件：

电泳：200v

电转：半干，15v，30min

1st Ab: overnight

2nd Ab: 1h,RT

Development: ECL, 3min


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2013-8-3 15:18
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2013-8-3 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是你加的样有杂质
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2013-8-3 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

就是比如细胞裂解液裂解后，加了buffer煮，煮完没离心活离心不干净。样加到孔里杂质一般掉中间，电泳时候中间就没了啊，我猜
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发表于 2013-8-3 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 zsxan1990 于 2013-8-3 15:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

就是比如细胞裂解液裂解后，加了buffer煮，煮完没离心活离心不干净。样加到孔里杂质一般掉中间，电泳时候中间就没了啊，我猜

谢谢回复。但是我觉得这个原因有点牵强。
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发表于 2013-8-3 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上样量是不是比较多？降低上样量看看呢。
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发表于 2013-8-3 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上样量是不是比较多？降低上样量看看呢。

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10ug（about10ul） sample, 应该不多啊
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89tongzijun[使用道具]
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发表于 2013-8-3 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白不均一，上样前用涡旋仪混下试试看。
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pencil菲[使用道具]
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发表于 2013-8-3 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 89tongzijun 于 2013-8-3 15:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
蛋白不均一，上样前用涡旋仪混下试试看。

有vortex before loading sample啊， 这个应该也不是问题的。
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2013-8-3 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的maker也是这样哑铃状的吧？那就是胶配的有问题，不是配方有问题，而是你制版没夹好，凝的时候没凝好
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2013-8-3 15:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的maker也是这样哑铃状的吧？那就是胶配的有问题，不是配方有问题，而是你制版没夹好，凝的时候没凝好

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Thanks so much.

Development的时候marker没有显示。但是在transfer以后，marker还是很正常的。不过你说的这个可能性还是有的，只是做的时候又不漏胶，如何预先知道配胶有问题啊？

我一般把gel的recipe全部加完后，再vortex几下，应该也是均匀了的，隔个半分钟让bubble减少一点，然后用1ml的tips加resolving gel，一般加个7.5ml, 再用95% ethanol封胶，这个过程有哪里不妥的地方吗？
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