小中大公司想用简易的方法来检测DHA胶囊中DHA的含量，我查过，标准方法是用气象色谱检验，实验室没有，只有液相色谱，我在中国生物工程杂志上看到一篇关于高效液相色测定发酵液中DHA的方法，看后感觉不适合用来检验DHA胶囊，前处理不一样，想请各位大侠帮忙看一下方法，该怎么来处理。另外文献中关于DHA检验的传统化学显色-二苯胺显色测定法，我也想试一下，但不清楚该怎么来处理我的样品，有知情的大侠还望多赐教！不胜感激！
方法：器与试剂 高效液相色谱仪：Alhech 426HPLC Pump；LINEAR UVIS 200紫外检测器；微孔滤膜
为孑L径0．45i~m，上海亚东核级树脂有限公司；其余试剂均为国产分析纯。1．1．2 样品 1，3．二羟基丙酮(dihydroxyacetone．dimer)标样购于Sigma(USA)公司，待测样品为产DHA菌种接种甘油发酵培养基30℃培养3d后取发酵上清液。
1．2 方法
1．2．1 DHA 显色测定法 DHA 发酵液离心(2500r／min，15min)，取1ml发酵上清液稀释成lOml，取0．5ml十倍稀释液与4．5ml显色液在试管中混匀，置于沸水浴中反应，流动水冷却后于721分光光度计620nm处测定其吸光值A。
1．2．2 高效液相色谱分析条件色谱分离柱：Alltimac18(5 m，250×4．6mm)；流动相：5％ 甲醇的水溶液。(加入0．05％H3PO 调pH值至3．0)；流速：1．0ml／min；柱温：25℃ ；进样量：10txl；检测波长：200nm。
1．2．3 标准曲线的制作 电子天平上精密称取1。3_二羟基丙酮(DHA)标样2．000g至100ml容量瓶中，加水定容至刻度，即得二羟丙酮浓度为20．0g／L的标准储备液。精密移取DHA标准储备液各1．0 ml、2．5 ml、5．0 ml、7．5 ml、10．0ml、15．0ml、20．0ml至100ml容量瓶中，定容至刻度，即得浓度为0．2g／L、0．5g／L、1．os／L、1．5g／L、2．0g／L、3．0g／L、4．0g／L的标准溶液。进样10txl，以吸光值或峰面积对应浓度(g／L)进行回归分析。
1．2．4 样品处理 将实验室保藏的可产DHA菌种从斜面保藏培养基(5％甘油，0．5％酵母膏，0．5％蛋白胨，0．3％碳酸钙)接种种子培养基(10％甘油，0．5％酵母膏，0．3％ 碳酸钙)30℃ 培养24h后取1ml接种至25ml发酵培养基(10％ 甘油，0．5％ 酵母膏，0．3％碳酸钙，0．5％磷酸二氢钾)中。发酵60h后取样，6000r／min离心5rain，将发酵液上清液稀释数倍后用微孔滤膜过滤，所得滤液直接进样测定。
2 结果
2．1 DHA显色测定法标准曲线
将DHA浓度为0．1，0．2，0．3，0．5，1．0，2．0，3．0g／L的标准储备液与二苯胺显色液煮沸反应15min待冷却后测定吸光值得到标准曲线(图1)。
2．2 检测波长和流动相的选择
DHA为最简单的酮糖，在其结构中的酮基有2个主要的紫外吸收峰，分别是195—205rim和270rim处
(图2)。在200nm附近有最大吸收峰，因此选择检测波长为200nm。由于DHA为非极性化合物，所以应用反相键合相色谱法，甲醇水溶液为流动相，烷基键合为固定相进行检测。经多次实验最终选择流动相为5％甲醇的水溶液，再加入0．05％H PO 调pH值至3．0。
谱图没粘贴上，想让各位看一下检验方法，看看DHA胶囊该如何处理！谢谢！
