【求助】提蛋白时细胞很粘稠怎么办？

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标题:【求助】提蛋白时细胞很粘稠怎么办？

koook5695[使用道具]
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发表于 2013-8-9 09:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

J774细胞，消化下来后在裂解液里面也会粘在一起成“鼻涕”状，用枪也吹不散，会影响提取蛋白的效果吗？需要先煮沸吗？

qhyu[使用道具]
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发表于 2013-8-9 10:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白浓度太高了，热变性以后可能变成“鸡蛋羹”一样的凝胶状态。
1，000，000细胞一般至少用裂解液100微升，酌情增加。

xingyi08[使用道具]
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发表于 2013-8-9 10:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

超声以剪切基因组，就不发粘了，提取跨膜蛋白（能尽量保留生物活性的）可以用以下试剂盒

lixi559[使用道具]
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发表于 2013-8-9 10:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白浓度太高了，增加裂解液的量，同时可以用超声碎裂器碎裂，如果没有这个可以把加裂解液的细胞悬液放在六孔板里，用tip倒过来反复的磨

8s5g[使用道具]
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发表于 2013-8-9 10:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我又一次裂解液加少了，煮过之后就是胶状了哦。

还是要注意细胞的数量的

koook5695[使用道具]
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发表于 2013-8-9 10:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白浓度太高了，增加裂解液的量，同时可以用超声碎裂器碎裂，如果没有这个可以把加裂解液的细胞悬液放在六孔板里，用tip倒过来反复的磨

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但是同样的裂解液裂解等量不同种类的细胞为什么差别那么大呢？HELA细胞好好地，J774就粘稠的不行

caihong[使用道具]
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发表于 2013-8-9 10:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

超声，DNase，homognizer，断裂DNA的都应该能减少黏稠度。

966735obeng[使用道具]
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发表于 2013-8-9 10:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

4°离心135000转10分钟可以吗？然后用10ul枪头挑去粘稠物。

lxh031[使用道具]
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