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标题:【求助】这是-70超低温冰箱的影响吗？

xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2013-8-14 13:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】这是-70超低温冰箱的影响吗？


我的实验材料是水稻。一个是新鲜水稻（处理后直接水洗然后开始提蛋白），另一个是超低温冰箱保存了10个月的水稻（保存前先用自来水洗过超纯水又洗了3次）。同样的品种经过同样的处理。提蛋白的方法相同（药品和胶条也是同一批次）。IEF和SDS-PAGE的条件相同。图像扫描的条件相同。但是结果相差巨大！！！（注意哦，两张图的染色结果也不同，保存过的材料背景黑乎乎的）难道超低温冰箱保存会对蛋白有这么大的影响？还是其他的什么原因？我已经想破脑袋了。。。希望各位大侠帮我分析分析！多谢！


这是新鲜材料


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发表于 2013-8-14 13:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是超低温冰箱保存过的材料


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 小中大

都是7cm 的胶条
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xueyouzhang[使用道具]
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 小中大

两种材料的蛋白浓度差不多，上样量都一样。
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发表于 2013-8-14 13:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

-70超低温冰箱保存10个月时间太长，中间会发生很多事情，基本降解的可能性相当大。材料来源不麻烦的话还是建议重新取样做了。
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发表于 2013-8-14 13:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢，今天开始准备用新鲜材料和超低温冰箱保存的材料做一次平行实验（从样品制备开始）。同时开始种水稻。
实验就这么被耽误了，不甘心啊~55
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发表于 2013-8-14 13:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

只是有一个问题我不明白，如果蛋白被降解，怎么测蛋白含量的时候还会有吸收值呢？而且测得两种材料蛋白浓度差不多的。
谢谢！
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leifengta[使用道具]
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发表于 2013-8-14 13:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道你是用什么方法来测定浓度的，即使蛋白质被降解，还是以一种小分子量的蛋白质分子存在，一些测定方法还是能测出浓度的。
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2013-8-14 13:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是用Bradford法。
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2013-8-14 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

经过验证，的确是材料出了问题。
-70冰箱保存的材料也会有问题，除了笑一笑，还能让我怎样呢？
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