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标题:分享经验：高乌甲素的测定

haohaorenjia[使用道具]
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发表于 2010-3-3 23:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分享经验：高乌甲素的测定

　　一.样品分子结构

　　二. 样品来源记录

　　样品商品名：

　　样品测定描述：主成分含量测定

　　生产厂家：

　　三. 液相方法条件

　　方法来源：根据客户提供方法改进;

　　具体方法：

　　色谱柱：Ultimate® XB-C18，5um，4.6×250mm，Ult091019P13; 波 长：252 nm;

　　流动相：甲醇：50mM磷酸二氢钠溶液=75：25(混合后的pH用三乙胺调节至8.40，剂量为甲醇150ml和50mM磷酸二氢钠溶液50ml，混合后加入三乙胺约1.5滴);

　　温 度：室温 15度;

　　流 速：1.0 ml/min;

　　进样量： 20 ul;

　　流动相的配制：

　　准确称取磷酸二氢钠50mmol，溶于1000ml水中，搅拌均匀;准确量取甲醇300ml与配制好的50mmol/L的磷酸二氢钠溶液100ml混合，搅拌均匀，超声脱气，冷却至室温;再往该混合溶液中加入75ul三乙胺;

　　样品处理方法：

　　用流动相溶解样品(浓度未知，是客户配制，然后我们用流动相稀释至原来浓度的1/4倍);

　　注意事项：

　　1. 与客户提供方法的唯一区别：

　　1)往流动相中加入磷酸二氢钠做缓冲盐，得到浓度为50mmol/L的磷酸二氢钠溶液;

　　2)往混合好的流动相中适当的加入了75ul的三乙胺;

　　2. 用流动相溶解样品;

　　3. 色谱柱的维护：

　　1)一天分析开始前，先用甲醇：水=20：80以1ml/min冲洗色谱柱30min，然后用流动相走基线，基线平稳后进样;注意：由于流动相中磷酸二氢铵的浓度比较大(浓度为100mmol/L)基线比较难平衡，可能需要45～60min;

　　2)一天分析完成后，先用甲醇：水=20：80以1ml/min反向冲洗色谱柱40min，再用甲醇：水=90：10反向冲洗色谱柱45min;

　　4. 缓冲溶液，隔天需重新配制。

　　四. 谱图及数据

　　1. 样品第一针：12.80min处的峰为高乌甲素峰

　　


　　2. 第二针重现性测试：

　　

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tang1986gdfs[使用道具]
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发表于 2010-3-4 09:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
想请问一下：经常反冲色谱柱，对色谱柱会不会有伤害。
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心情se567[使用道具]
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发表于 2010-3-4 10:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
保留时间是不是比较推迟，有没有用乙腈试过呢
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mingdongmmw[使用道具]
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发表于 2010-3-4 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢，很好的帖子，值的学习。
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haohaorenjia[使用道具]
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发表于 2010-3-4 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 tang1986gdfs 于 2010-3-4 09:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
想请问一下：经常反冲色谱柱，对色谱柱会不会有伤害。

不会的，是关于正向使用反向冲洗这种维护方式优劣的。
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hplcangel[使用道具]
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发表于 2010-3-4 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢分享！
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uwku58h[使用道具]
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发表于 2010-3-4 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
12分钟长吗？我测的东西一般都要30~50min才走完。第一针基线有点漂。
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命运--ses[使用道具]
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发表于 2010-3-5 10:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有缓冲盐，平衡时是要久点
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