蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳的一些问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 17  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳的一些问题

daod[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76758
精华 0
积分 585
帖子 790
信誉分 100
可用分 4891
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
1

发表于 2013-8-15 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳的一些问题


刚开始电泳的时候，样品总跑不动。到后面了，各泳道的溴酚蓝连成了一条线，各泳道之间的样品有些串样，不知道是怎么回事。恳请各位指教。
顶部
zhezhe[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72891
精华 1
积分 610
帖子 856
信誉分 102
可用分 5088
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态 离线
2

发表于 2013-8-15 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
刚开始电泳的时候，应该将电压设置小点，让样品缓慢进入凝胶，然后再加大电压。
溴酚蓝是小分子，很容易在凝胶的分子筛孔中扩散，造成溴酚蓝连成了一条线。
如果样品串样，你可以隔一个泳道点一个样。
顶部
daod[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76758
精华 0
积分 585
帖子 790
信誉分 100
可用分 4891
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
3

发表于 2013-8-15 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

因为刚开始用小电压，样品基本跑不动。隔泳道点样我也试过，好象效果不是很明显啊。
顶部
xyw5[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75137
精华 1
积分 620
帖子 815
信誉分 102
可用分 4991
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
4

发表于 2013-8-15 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是样品分子量太大了？可以适当减少胶的浓度。
样品有些窜样？可能是胶配的不均匀，这和配胶的时候没有混匀有关。
顶部
langlang[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77033
精华 0
积分 668
帖子 976
信誉分 100
可用分 5741
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
5

发表于 2013-8-15 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是不是样品分子量太大了？可以适当减少胶的浓度。
样品有些窜样？可能是胶配的不均匀，这和配胶的时候没有混匀有关。

======================================

同意楼上的。还有电样的时候样品是否溢出串样呢？
顶部
ritou1985[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77664
精华 0
积分 644
帖子 948
信誉分 100
可用分 5596
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
6

发表于 2013-8-15 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

跑蛋白溴芬兰连成一条线，个人觉得是正常现象，原因同意zxw_7854说法，但是转完膜会发现，丽春红然出来的蛋白样品条带其实跑得挺好。这种现象上样量多得时候更常见。
串样不知道啥意思，如果指上面的现象那没关系，如果是染出来蛋白条带串样，我还真没见过，是不是说蛋白条带的宽度大于加样孔的宽度？那与加样量有关，量大会变宽的，那可以在两边的空白孔里也加大量蛋白，大家一样宽便不影响分析。
最好有图贴出来大家一起分析分析！
顶部
shenkunjie[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76942
精华 0
积分 712
帖子 1124
信誉分 100
可用分 6420
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
7

发表于 2013-8-15 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是这样的呀，刚开始的跑压缩胶的时候电压较小，跑的很慢，大概2-3个小时才跑3-4cm，然后电压大概增大一倍，感觉是越跑速度越快，再最后的半个小时大概都要跑几厘米，而且溴芬兰也被压成一道线了。染色的时候在孔道的间隔处并没有带的影子，所以我觉得应该不会串样。
顶部
68943512yao[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108886
精华 0
积分 212
帖子 164
信誉分 100
可用分 1557
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
8

发表于 2013-8-15 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

小电压是多少呀？我的100V 30min 150V 90min 时间不到就打头了。
另。醋酸纤维膜有正反之分吗？
顶部
wood533[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
9

发表于 2013-8-15 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我记的分子克隆上有，8-15v/cm，测一下胶长，算出各个阶段要用多大的电压就可以了。
另外溴芬兰逐渐变成一道线了我认为对结果无明显影响。
顶部
yjf1026[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76421
精华 1
积分 497
帖子 670
信誉分 102
可用分 4116
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
10

发表于 2013-8-15 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关于电泳电压：开始时，电压应为8V/cm凝胶，染料进入分离胶后，将电压增加到15V/cm凝胶，继续电泳直到染料到达分离胶底部，切断电源。
至于溴酚蓝成了一条线绝对属于正常现象，溴酚蓝只是作为前沿指示剂，并不影响电泳结果。
还有，制完凝胶后，千万别忘记将封条取下来在电泳，否则由于电阻太大，样品就跑不动（自己有过惨痛的教训）。
顶部
 17  1/2 12››