蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】pet32a融合表达

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】pet32a融合表达

xueyouzhang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76770
精华 0
积分 470
帖子 640
信誉分 100
可用分 3996
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
1

发表于 2013-8-16 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】pet32a融合表达


我用pet32a这个载体融合表达一个大约5kb的蛋白。用IPTG诱导后在25Kd附近有了新的条带。但是作为对照的pet32a诱导前后似乎没有什么变化，这是怎么回事呢？按理说应该有个trA的硫氧还蛋白亚？
请教各位高手了！
顶部
lgm[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75381
精华 1
积分 374
帖子 383
信誉分 102
可用分 2781
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
2

发表于 2013-8-16 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用pet32a这个载体融合表达一个大约5kb的蛋白。用IPTG诱导后在25KB附近有了新的条带。但是作为对照的pet32a诱导前后似乎没有什么变化，这是怎么回事呢？按理说应该有个trA的硫氧还蛋白亚？
请教各位高手了！

============================================

你说的是kb还是kD？
如果对照的pet32A在诱导前后没变化，那别的就不要谈了。
顶部
xueyouzhang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76770
精华 0
积分 470
帖子 640
信誉分 100
可用分 3996
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
3

发表于 2013-8-16 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不好意思 打错了 是KD
但是为什么重组菌能表达呢？
顶部
pencil菲[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75646
精华 1
积分 410
帖子 476
信誉分 102
可用分 3191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
4

发表于 2013-8-16 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用pET32a表达，根据我过去的经验，很少能见到载体本身表达的，我做了很多次，只有一次见到载体诱导后有Thioredoxin融合蛋白的表达。所以我的意思是，这是很正常的。
顶部
00无名指00[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76070
精华 0
积分 493
帖子 666
信誉分 100
可用分 4151
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
5

发表于 2013-8-16 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我所做的pet32a对照，全部都有TRX表达，诱导后应该表达才正常，如果TRX都不表达，后面的蛋白表达的确难以让人理解，呵呵
顶部
jkobn[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75366
精华 0
积分 468
帖子 574
信誉分 101
可用分 3711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
6

发表于 2013-8-16 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也做pet32a的融合表达，对照都有TRX表达。本来在别的质粒上表达是包涵体的目的蛋白在32a几乎全都是可溶表达了，但是活力检测基本没有活力，请问各位有没有切除标签以后可以显著增加活性的经验啊？
顶部
66+77[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75637
精华 1
积分 596
帖子 785
信誉分 103
可用分 4751
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
7

发表于 2013-8-16 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想冒昧问一句，TRX蛋白有多大呢？
顶部
jkobn[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75366
精华 0
积分 468
帖子 574
信誉分 101
可用分 3711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
8

发表于 2013-8-16 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
11kD
顶部
bring[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74282
精华 0
积分 597
帖子 914
信誉分 100
可用分 5326
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
9

发表于 2013-8-16 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

16-17kd吧？
顶部
ladyhuahua[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76658
精华 0
积分 984
帖子 1667
信誉分 100
可用分 9116
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-8
状态 离线
10

发表于 2013-8-16 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这么小的蛋白你做SDS-PAGE的时候看的到吗？一般我们做的时候Marker都只有5个而不是7个，你的是不是也跑出去了？
顶部