小中大
Q:4度保存的PAGE胶半年时间（或其它时间）后还可以做质谱分析吗？
A:胶上的蛋白质带只要没有扩散就可以。
Q:手工切胶时使用的工具。我是用注射器把针头前端磨平，然后硅烷化。
A:我是直接用刀片切的带和点。
Q:切胶后是否一定需要切成1mm3的小块，如何切碎？切碎后如果被枪头吸掉如何解决？
A:不一定要切成这样，我们的目的是使脱色干净，胶内蛋白尽可能被酶切。
Q:银染和考染凝胶块的脱色方案。脱色时间，次数，脱色液成分等
A:银染，3％H2O2/25mM NH4HCO3/H2O,时间15－20MIN,加水中止反应，加
100％ACN 10min，然后冻干。个人觉得比铁氰化钾和硫代硫酸钠好。
考染，100mM NH4HCO3/30％ ACN,脱色干净。加100％ACN 10min，然后冻干。
Q:trypsin使用量。是根据胶块大小，还是根据估计蛋白含量，或其它？
A:看蛋白的量而定。一般为1:20，我觉得较理想。
Q:加trypsin后是否应放4度一段时间，如果是，要多长时间？
A:放4度是为了让酶尽量进入胶内，与蛋白充分接触。一般为1个小时。
Q:可以检测到的蛋白量范围是多少？是否考染可以看到的点都可以质谱鉴定出来？银染点鉴定效果如何？
A:这得看你使用哪种质谱，MALDI-TOF的灵敏度较高，而ESI的分辨率较高。现在质谱种类很多，各种质谱可以进行串连，产生了灵敏度和分辨率都比较理想的质谱，如Q－TOF.银染的小点用MALDI-TOF较好，考染的点用LC-MS/MS鉴定的蛋白较准确。
暂时这么多，下次再说。
