小中大【求助】脱盐柱
我用G15凝胶填料来脱盐。但是上完样品后,一点活性活性都没有了。
我的样品的处理:80%的硫酸铵沉淀发酵液的上清液后,用蒸馏水溶解样品,然后上G15脱盐柱(自己填的柱子),柱体积是68.9mL,上样体积为5mL,流速为1mL/min,流动相为蒸馏水,收集样品后浓缩为约4mL,检测发现没有活性了。电导检测,也脱掉了部分盐。
我之所以选用G15的填料来脱盐,是因为我的样品的分子量大约在4到5 kD。
实在想不明白,经过了简单的凝胶柱,样品怎么会没有了活性呢?太奇怪了,所以上来,求助,请大家帮忙分析一下,或者有什么好的建议呢?
我目的就是想脱盐,因为分子量小,所以透析的损失很小,所以选用G15凝胶填料来脱盐。是不是脱盐柱对流动相也有要求呢?
急盼大家回复!