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标题:【求助】请大家帮我分析下图

ero11[使用道具]
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发表于 2013-8-19 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请大家帮我分析下图


大分子量蛋白有拖尾，不知道怎么解决，请大家给些意见！


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2013-8-19 15:18
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2013-8-19 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
噪音比较大啊，背景非特异性多。是否洗一抗及二抗时未洗净呢？

建议多洗一段时间。
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发表于 2013-8-19 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我没做抗体，只是提取植物蛋白跑双向电泳。跑了几次，小分子量区域的点都比较圆，但大分子量区域有拖尾，不知道怎么解决，查了资料，猜想有以下可能

1.配Tris-Hcl的Tris不纯，

2.平衡时DTT的量不够，

3.1M DTT 时间放的太长

4.第一次平衡时DTT没有滴干净，影响了第二次IAA平衡.

但自己不知道猜想得对不对!

希望大家给我点建议，怎么样解决拖尾。
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发表于 2013-8-19 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不是高手，发表一下个人浅见：

感觉胶的背景不是很干净，拖尾（竖条纹）的原因很可能是二向缓冲液的问题。建议重新配制缓冲液，保证好SDS的量及PH的准确性。
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ero11[使用道具]
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发表于 2013-8-19 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #4 youyou99 的帖子

谢谢你给我意见，你说的是电泳缓冲液吗？每次跑第二向用的电泳缓冲液都是新配置的！
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youyou99[使用道具]
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发表于 2013-8-19 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ero11 于 2013-8-19 15:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
谢谢你给我意见，你说的是电泳缓冲液吗？每次跑第二向用的电泳缓冲液都是新配置的！


是电泳缓冲液。上槽液最好每次都用新的，下槽无所谓，时间可以长一点。可以配成10×的，用时稀释，还是注意PH的准确性（旧的只要好一样用），个人觉得这很关键，尤其Tris-HCL的PH要调准。实在不行，尝试一下上槽用2×的跑。个人浅见，只供参考！
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发表于 2013-8-19 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

本人也是新手，感觉楼上说的挺有道理的，有一次电泳缓冲液没调PH，拖尾很严重，换了新的，调好PH，点就好看多了。
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ero11[使用道具]
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发表于 2013-8-19 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电泳缓冲液要调PH值的吗？我从来没调过哦!前几届的师兄师姐也没调过，都是这样教下来的！请问下你们的电泳缓冲液的配方是什么啊！怎样调PH值的，调到多少。我用的电泳缓冲液的配方是甘氨酸：21.6g，Tris-base 4.5 g，SDS 1.5 g，加水到1500毫升。我跑的是17CM的教条，用的是伯乐的电泳槽，每次我就跑一块板，本来是可以跑两块的，但还有一对板碎了，没有分上下槽电泳液！请问你们用的是GE的电泳槽吧！是一次可以跑六块板的，还是一次跑两块板的，用的电泳液是怎么样的？上下槽分别用多少的？2X电泳缓冲液是不是指21.6g，Tris-base 4.5 g，SDS 1.5 g，加水到750毫升。Tris-HCL的PH要调准,你说的Tris-HCL是用于配胶溶液的对不？一次问那么多，还问指点！
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发表于 2013-8-19 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也没有调过上层缓冲液的pH.是不是大家说的是配SDS胶的pH8.8的TRIS -CL呀？我们实验室的PH仪不太准，TRIS-CL的pH好像不太准，导致我的二相得跑7个半小时，而其他人的跑五个多小时就够了
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ero11[使用道具]
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发表于 2013-8-19 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

TRIS-CL的ph不准，跑的时间不会相差那么大的？可能是你跑二向的功率或电流比较小。把它调大点就可以节省时间了！
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