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标题:【求助】原核蛋白表达纯化

changlhsyo[使用道具]
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发表于 2013-8-19 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】原核蛋白表达纯化

在大肠杆菌BL21中表达了一个酶，产生包涵体，优化后可以产生有活性的该酶。镍柱纯化时在目的条带附近总伴随有另一条带（或者多条），用了离子交换除不去，而且也不知道哪条是我的目的条带。有图
请高人指教有何办法将其分离纯化？
另外：包涵体蛋白和胞内上清中的目的蛋白跑SDS-PAGE时，条带一定在同一位置出现吗？


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2013-8-19 17:21
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发表于 2013-8-19 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

离子交换试过哪些条件?

疏水试过吗？
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发表于 2013-8-19 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

终止密码是什么？
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发表于 2013-8-19 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
离子交换试过哪些条件?

疏水试过吗？

==================================================================

就一般的离子交换，没试过疏水，我就想问纯化后为什么会是两条带，是杂蛋白，还是？
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发表于 2013-8-19 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
终止密码是什么？

===================

这跟终止密码没关系吧？
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发表于 2013-8-19 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 changlhsyo 于 2013-8-19 17:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
终止密码是什么？

===================

这跟终止密码没关系吧？

信不信由你，最好的终止密码是 TAAT

Termination efficiencies varied significantly depending on both
the stop codon and the fourth nucleotide, ranging from 80%
(UAAU) to 7% (UGAC). These findings indicate that the
identity of the nucleotide immediately following the stop
codon strongly influences the efficiency of translational termination
in E. coli (1).

1 Poole, E. S., C. M. Brown, and W. P. Tate. 1995. The identity of the base
following the stop codon determines the efficiency of in vivo translational
termination in Escherichia coli. EMBO J. 14:151–158.
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2013-8-19 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 zranqi_1 于 2013-8-19 17:24 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


信不信由你，最好的终止密码是 TAAT

Termination efficiencies varied significantly depending on both
the stop codon and the fourth nucleotide, ranging from 80%
(UAAU) to 7% (UGAC). These findings indica ...

那我向问一下，纯化后在目标蛋白下方出现另一条带，是什么原因啊？是杂蛋白？谢谢啊
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发表于 2013-8-19 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很有可能是你纯化的蛋白和这个杂蛋白有相互作用
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2013-8-19 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 131415 于 2013-8-19 17:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

很有可能是你纯化的蛋白和这个杂蛋白有相互作用

那有没有可能是信号肽被切除，留下的带
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2013-8-19 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那我向问一下，纯化后在目标蛋白下方出现另一条带，是什么原因啊？是杂蛋白？谢谢啊

===============================================================

为什么上面这条是目标蛋白，而不是下面那条呢？

那篇文献中说的也只是一个效率（%），并不是肯定100%会发生，只是存在这种可能性。
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