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标题:【求助】SDS-PAGE出问题，求帮忙。

luoliqiong[使用道具]
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发表于 2013-8-19 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE出问题，求帮忙。

最左边是蛋白marker，条带不清楚，而且比说明书上的少了两条条带。右边两个是样品。做胶用的试剂都是新配制的，应该没问题。做了两次都是这样，左右边的样品在跑电泳时候可以看到在点样空里又东西没跑出来。不知道是不是样品的蛋白浓度太大？求高手指点一下，我是菜鸟。


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2013-8-19 17:54
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nut6694[使用道具]
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发表于 2013-8-19 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你看看你的电泳缓冲液有没有为你，条带都弥散的
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发表于 2013-8-19 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

样品煮了后有明显胶体状的东西没
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junjie05[使用道具]
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发表于 2013-8-19 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得和样品浓度没有关系，还是电泳的问题。1.检查一下电泳缓冲液，必要时重新配置
2.电泳时观察一下电泳仪上显示的电压和电流，是不是电泳仪接触有问题
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发表于 2013-8-19 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
样品煮了后有明显胶体状的东西没

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是的，样品煮了之后放入-20度冰箱过夜后就变成了凝胶状的了？
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luoliqiong[使用道具]
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发表于 2013-8-19 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得和样品浓度没有关系，还是电泳的问题。1.检查一下电泳缓冲液，必要时重新配置
2.电泳时观察一下电泳仪上显示的电压和电流，是不是电泳仪接触有问题

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电泳仪没问题，我们实验室的其他人也在用，他们的胶跑的很好。我再试试看缓冲液是不是有问题，重新配一下，再跑试试。
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2013-8-19 17:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
样品太浓
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发表于 2013-8-19 18:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感觉分离胶聚合不是很好，如果样品过浓，煮过之后离心，点样时取上清；还可以减少上样体积再试试。
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luoliqiong[使用道具]
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发表于 2013-8-19 18:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
样品太浓

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谢谢了。就是因为样品浓度太高了，稀释了100倍以后条带很好，很清晰。
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luoliqiong[使用道具]
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发表于 2013-8-19 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感觉分离胶聚合不是很好，如果样品过浓，煮过之后离心，点样时取上清；还可以减少上样体积再试试。

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谢谢了。是样品浓度太高的原因，问题已解决，但还是谢谢关注。
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