小中大【求助】western blot三个月了，一直是目的蛋白还可以
我从今年10月份开始做western，可一直没出来什么实质性的结果。内参总是不好。
现在有几个问题想请教一下各位：
昨天做的时候，发现电泳的速度特别慢。我用的是15%的分离胶，5%的基层胶。我用的是BIORAD的垂直电泳装置。梳齿底部到两胶分界处的距离大概有1.5cm，电泳了70分钟才到交界处。后来我换了一下外槽的电泳液，，跑分离胶的时候快了一些。我使用60V恒压跑积层胶，90V跑分离胶。这样可以吗？
电泳速度慢，主要跟什么有关系呢？
还有很多人在论坛里都说要赶走凝固好的胶的底部的气泡，我们实验室的都没赶过。昨天我也发现胶两块玻璃板的底部是有不少气泡，对电泳速度有什么影响？如果要赶得话，那怎么去赶下边的气泡呢？
我的目的蛋白是12KD的，用的内参是β-actin,转膜的时候用38min可以吗？我们实验室用的是BIORAD的半干转膜仪。
昨天我做的过程中，发现转完膜之后，内参的那条带上的marker还有很多停留在胶上，膜上面倒是也有，只是颜色比较淡。我用的是fermentas的预染彩虹marker。后来想一下，我在转膜前用75%的酒精把赶气泡用的玻璃棒擦了一下，紧接着就用来赶气泡了，乙醇会不会对转膜有影响
