小中大相关疾病:
脱水
cross-linking的理解是对的,但反应浓度和时间很讲究。否则会发生与非complexed蛋白偶联。edc的作用机理是: 先与蛋白的羧基(COOH)脱水形成活性中间体, 然后与氨基反应成稳定的脒键(amide bond)。这个活性中间体能迅速降解, 所以已经形成complex的蛋白被相互连接的可能性大大于与非complex的蛋白。所以控制反应浓度,时间很重要。
共沉淀的理解不对。比如:你用抗A的抗体作IP, IP下来的complex跑胶分别用抗A,抗B,抗C的抗体WB检测, 如果3个抗体都出现信号,那么初步认为是ABC是复合体。如过出现了A,C而无B信号,是A-C复合体,如过出现A,Ber无C信号,是A-B复合体。如果出现B,C无A信号,无效。
你可以用任何一个或A或B或C的抗体作为IP抗体。 只要是Complex, 用哪一个抗体IP,结果一样。问题在于那一个抗体能IP。 complexed蛋白的epitope也许会被覆盖,就IP不成了。