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标题:【求助】蛋白定量时蛋白浓度很高，是否能代表蛋白...

chuntian1983[使用道具]
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发表于 2013-8-20 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白定量时蛋白浓度很高，是否能代表蛋白...


我最近做WB总是不顺，新提取了组织蛋白，跟实验室一位师兄在相同条件下作了内参，结果我的内参明显弱很多，目的蛋白更是啥也没有啊！我前几天刚提的蛋白，并且做了蛋白定量，浓度很高的，为什么蛋白还是不行呢？求解（撞墙啊:(）
还有我的动物标本在-80度保存了8个月了，难道是降解了吗？-80度可以保存这么久吗？之前有实验室的同学找标本时不是很注意，把-80的冰箱找到-30多，我碰到过一次，但具体发生了几次我也不知道啊，跟这种找标本时不注意有关吗？(蛋白坏了就死定了。啊~~~~~~~~~)
大概两个月之前我用这批蛋白做出来过啊，为什么现在不行了，蛋白坏了吗？？？？？
希望各位战友给出宝贵意见，谢谢！！
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发表于 2013-8-20 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 chuntian1983 于 2013-8-20 15:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我最近做WB总是不顺，新提取了组织蛋白，跟实验室一位师兄在相同条件下作了内参，结果我的内参明显弱很多，目的蛋白更是啥也没有啊！我前几天刚提的蛋白，并且做了蛋白定量，浓度很高的，为什么蛋白还是不行呢？求解（撞墙啊:(）
还有我的 ...

不能代表有没有降解
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douding66[使用道具]
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发表于 2013-8-20 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

LZ，一般蛋白测蛋白浓度后用蛋白上样沸水变性放置-80应该是降解不会很厉害。。。但是不知道你是否有反复冻融？？？有兴趣看看我们实验室。
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2013-8-20 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
的确8个月有点悬，时间蛮久了，而且中间还转移过几次，降解不是没有可能，但是你的试剂比如抗体这些东西是不是都是很好保存的呢，值得好好查找原因，毕竟之前是做出来过，实验要尽量速战速决。
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ero11[使用道具]
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发表于 2013-8-20 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得动物标本放那么长时间里面蛋白很有可能降解
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2013-8-20 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你可以检测一下你的蛋白是否降解，跑个电泳，转膜后用丽春红染一下，看看是否降解，特别是你需要的那条带是否还存在，如果存在降解了也没关系，你可以继续加一抗，完成你的实验。
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2013-8-20 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
肯定是降解了
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cwcwcww[使用道具]
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发表于 2013-8-20 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

降解的可能性比较大
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fox_79[使用道具]
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 小中大

个人认为蛋白降解的可能性更大，但前后实验使用的抗体是否一致？
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nn255[使用道具]
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发表于 2013-8-20 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

内参都很弱，可能是没有目的蛋白；但是建议你重新提一下蛋白，然后不保存立马做一下，和楼上的战友一样建议你转完膜后丽春红检测下，看看目的片段有无。毕竟会出问题的地方有很多，你还是要细心的排除一下。
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