小中大首先感谢阁下的关注。您说的标准应该是小样菌体吧,我一般摇1L的菌,大约有6g的湿菌,裂解缓冲液25ml/g重悬沉淀,然后全部拿去超声,从泥沙样浑浊状态到澄清,没实现过,所以也不知道怎么判定是否完全破碎。因为菌体较多,超声时间过长,有些蛋白碳化的现象了,所以一般到“某种”状态,我就不超了。
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不要说6g菌,选择好超声探头和超声功率,100g菌体,1000ml破菌缓冲液也可以用超声一次来破菌。
“蛋白炭化”应该是不可能的啦。
超声破菌要注意的是降温。冰水浴不可少,破菌液也可预冷。
一般用工作4秒,间隙4秒,超声200次足够了。总时间大约25min。
对破菌来说,没有必要去判定是否完全破碎。因为你要的是重组蛋白,而不是破菌率。即使有部分菌体没有破碎又有何妨呢。