月旭C18，5μm，4.6*250mm应用实例

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标题:月旭C18，5μm，4.6*250mm应用实例

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发表于 2010-3-12 17:35 资料个人空间短消息加为好友

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加入缓冲盐及改变其浓度对本人色谱实验的影响

一．样品分子结构

本人做的是合成，利用高效液相来判断反应的终点。反应底物溶于碱性环境。由于目标分子的结构还未最终确定，所以抱歉暂时不能告诉大家。

二. 样品来源记录
对反应进行实时监测，每0.5h或1h取样一次。用注射器取反应液，过0.45μm微孔滤膜，即可。
三. 液相方法条件

本人在前期试验中用ph8的磷酸缓冲盐（0.2mol/L）。流动相为：流动相ph8的缓冲液：乙腈=95：5，1ml/min，柱温25℃，检测波长为220nm。进样量1μl

色谱图为：反应底物

反应2h后反应液

后因为要分离出目标产物，准备先上液质确定一下目标物分子量。但因为液质不能用磷酸缓冲盐，所以试了一下甲醇水，乙腈水，结果如下：

流动相：甲醇：水=10：90。样品为反应了1h的反应液。其他液相条件同上。

流动相：乙腈：水=5：95。样品为反应了1h的反应液。其他液相条件同上。

前期试验结果表明，反应了1h的反应液应该有三个峰，而从上面两个图可以看出，只有一个峰，并且基线往下飘。相比前期试验条件，只有流动相的ph改变了，所以我们推断这种奇怪的现象的原因就是流动相的ph改变所致，于是我们马上又用流动相ph8的缓冲液做流动相，其他液相条件同上。

结果如下：（样品为反应了4h的反应液）

从上图可以看出，用流动相ph8的缓冲液时，各个峰已经分开，且基线没有出现下降现象。由此，我们断定，对合成反应体系进行实时监测，需要ph8的碱性环境。基于后续处理要用到液质不能用磷酸，在咨询老师之后，我们选择了用三乙胺来调节ph。

用三乙胺调ph8作流动相（三乙胺只用了一滴不到），其他液相条件同上。图谱如下：

从上图可以看出，结果仍然不行。老师建议用乙酸铵和氨水来调节ph。我们用20mmol/L乙酸铵和氨水调ph8，图谱如下：

上图与甲醇水、乙腈水、三乙胺作流动相的图谱比较，图谱从一个峰变成三个峰，各个峰已经明显分开，能够清晰辨别，与用磷酸缓冲盐做流动相的图谱相似，说明流动相改为碱性环境是对的，但是上图底物峰与目标峰还是分的不是很理想。比较20mmol/L乙酸胺和三乙胺跑的图，ph一样，我们觉得就是离子浓度不一样，20mmol/L乙酸胺离子浓度大于三乙胺的（三乙胺调节ph时，只有不到一滴。）遂决定在保证流动相的ph不变的情况下加大流动相的离子浓度，把20mmol/L乙酸胺上升到50mmol/L，其他液相条件同上。结果如下：

上图可以看出，三个物质已经完全分开了，图谱也与磷酸缓冲盐做的图谱时相似。达到了我们的要求。底物与目标物保留时间相差0.5分钟。但是这种保留时间差，上到制备液相是否可行，这种流动相（50mmol/L乙酸铵和氨水ph8）上到制备液相是否可行，还有待进一步试验。

对于本人的试验，我化学基础及液相基础较差，上面的一些推论及观点也是自己想的，也不知道是否正确，欢迎大家讨论和指点。另我的反应体系中试加入了碳酸氢钠（溶解底物），对于它的除去，我个人现在也是毫无头绪。欢迎大家指点。

　　对于本人的试验，我化学基础及液相基础较差，上面的一些推论及观点也是自己想的，也不知道是否正确，欢迎大家讨论和指点。另我的反应体系中试加入了碳酸氢钠(溶解底物)，对于它的除去，我个人现在也是毫无头绪。欢迎大家指点。

　　谈谈是使用月旭柱的心得：我在半年前购买了月旭C18，5um，4.6*250mm，最开始我不知道自己的液相条件是什么，所以也不知道自己到底该买哪种柱子比较好，经过销售员的推荐，刚好那个时候在打折，所以就购买了这跟柱子。这根柱子压力最开始的时候是80bar,一直是用这个比例：ph8缓冲液:乙腈=95：5，用了半年，现在上升到了98bar。个人认为还是不错的，而且这不是一根水柱，而是普通的C18柱。每次我用完缓冲盐后，我都是用大比例的水冲洗，再过渡到乙腈存柱，每次都是4h。由此，月旭柱质量还是可以的。基于本人的流动相，我打算再用一根月旭的水柱试一试。

[ 本帖最后由 HEC_css 于 2010-3-12 23:46 编辑 ]