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标题:【求助】等电聚焦后有白色物质析出是怎么回事

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【求助】等电聚焦后有白色物质析出是怎么回事


我做的是小鼠肺组织的双向电泳,用的是11cm的胶条,pH3-10,等电聚焦后胶条从中间位置到酸性端有白色的物质析出,半个胶条都呈白色的,不知这是什么原因?有谁遇到过没?注:提蛋白时用的溶解液是8.5 mol/L urea,2.5 mol/L thiourea,5%CHAPS,不知道是不是urea和thiourea的浓度高了,导致聚焦时有urea结晶析出?
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greenbee[使用道具]
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你估计是长江以南地区的吧?
这个问题的原因是你进行实验时的室温太低,冬天易出现这个现象。解决办法:泡涨和聚焦过程中都开制热空调,或者在25摄氏度孵箱中泡涨和聚焦。总之温度保持在25摄氏度左右。

我做的是小鼠肺组织的双向电泳,用的是11cm的胶条,pH3-10,等电聚焦后胶条从中间位置到酸性端有白色的物质析出,半个胶条都呈白色的,不知这是什么原因?有谁遇到过没?注:提蛋白时用的溶解液是8.5 mol/L urea,2.5 mol/L thiourea,5%CHAPS,不知道是不是urea和thiourea的浓度高了,导致聚焦时有urea结晶析出?
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哈哈,被你说中了,我们的确是长江以南地区,江西这边的,呵呵!现在的室温只有十几度了,泡涨的时候开了空调,聚焦的时候就没开了,我以为这个问题会很严重呢,以为是我的样本又出现了大的问题,怀疑自己的溶解液里的尿素和硫脲的浓度过高引起的呢
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没有,一直还存在这种现象,你的有所改善了吗?
我之前一直认为矿物油没有覆盖好,导致尿素结晶析出,或者是样品中有杂质导致的
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我又重新提了次蛋白,但是还没跑,不知是不是溶解液里的Urea浓度高了,不过问过很多人说这个没事,不会影响结果,你的有影响吗?
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呵呵,你放心跑吧,只要室温达到要求,我保证你不会再出这个问题。
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没有,一直还存在这种现象,你的有所改善了吗?
我之前一直认为矿物油没有覆盖好,导致尿素结晶析出,或者是样品中有杂质导致的
[/quot
每次等电聚焦后,我的胶条从中间位置到酸性端都有白色物质,但是经过两次平衡后,这些白色物质都消失了,但是跑出的电泳图谱有横纵条纹,特别是酸性端
今天我有重新跑了一次,发现白色物质的地方没有矿物油覆盖,可能导致的,我的矿物油加的挺多的,不知道中间怎么搞的,就没了
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我重新提了次蛋白,聚焦时也开了空调,但是还是出现了这个问题,奇怪了?
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junhun[使用道具]
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我觉得应该和环境温度无关吧,我觉得等电聚焦仪本身就有半导体控温板子能够传递热量,能够维持温度在20℃,不会随外界的温度改变而改变。
在夏天的时候可能环境温度太高,机器内外温差较大,等电聚焦仪的盖子上容易出现冷凝水,所以必须开空调,至于冬天说要开空调,我觉得没有必要。
我用的是GE的IPGhor3仪器,这可能与机器也有关吧,不知道limp用的是哪款机器?
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我用的也是GE的IPGhor3,还有谁知道出现这种白色是怎么回事吗?
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