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标题:【求助】蛋白质4°保存期限

30moonriver[使用道具]
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发表于 2013-8-30 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白质4°保存期限


我上个月中旬提取的蛋白，离心后连同提取液一起保存在4°冰箱，现在想接着用这些样品做SDS-PAGE，不知道蛋白是否降解什么的而导致跑不出条带不能定量了。
那么这个蛋白加提取液的溶液保质期大概有多久呢？提取液成分有TRIS，甘油，SDS，β-巯基乙醇，溴酚蓝。
请教！！！非常感谢！！
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发表于 2013-8-30 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问你为什么不放-20度呢？？
你在配方中没有提到蛋白酶抑制剂，不知道你加了没有。反正提取的蛋白放在4℃是很容易降解的，特别是来自消化道的蛋白更是容易降解。 放在-20℃ or -80℃都是很不错的选择的。
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发表于 2013-8-30 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
4度只能暂时保存的，要长期保存至少放-20度，你的蛋白很可能已经降解了，当然是没有条带了。此外你提取液也需要放进-20度保存，但是β-巯基乙醇要临用前加到提取液中。
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发表于 2013-8-30 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你是怎么提取的？你的这个提取液的组成怎么看着像是SDS-PAGE用的sample buffer呢？
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30moonriver[使用道具]
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发表于 2013-8-30 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你是怎么提取的？你的这个提取液的组成怎么看着像是SDS-PAGE用的sample buffer呢？

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呵呵，就是用来做SDS-PAGE的，本来是一直连续做的，只是中途匆促有点事情，就耽误了时间，特来问问这样保存还能跑出条带不。
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30moonriver[使用道具]
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发表于 2013-8-30 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问你为什么不放-20度呢？？
你在配方中没有提到蛋白酶抑制剂，不知道你加了没有。反正提取的蛋白放在4℃是很容易降解的，特别是来自消化道的蛋白更是容易降解。 放在-20℃ or -80℃都是很不错的选择的。

================================================

我做的植物蛋白，不过如您所说，4°是不可以长期存放，谢谢啦。
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发表于 2013-8-30 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果你收了蛋白后煮过，对很多蛋白而言放4oC一个月以上应该没什么问题，没必要加酶抑制剂。但如果没有煮过，那就难说了。
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lixi559[使用道具]
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发表于 2013-8-30 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用上样Buffer处理了，煮过以后，可以在4°保存很久么？
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发表于 2013-8-30 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白质很容易降解，一般低温保存，最好放-80度；我们一般放-80度；而且在提蛋白的裂解液中要加入蛋白酶的抑制剂。
已经用上样缓冲液煮沸的最好1-2天赶快用完
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S6044[使用道具]
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发表于 2013-8-30 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
其实还是得看你目的蛋白的量，如果很少，其实我就放-20o，临用前拿出来室温解冻；但一般情况下如果经常要做，我放4oC，至少一个月内做问题都不是太大，临用前稍微加热一下就行。
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