小中大
1 WB验证你的结果(验证多少蛋白视财力,文献分析而定)
2 参照别人文献,分析蛋白可能涉及相关功能,两个选择:
a: 文献已报道,成功可能性大,但意义小
b:未报道,风险大,但意义也大
3 下游实验具体参照你选择蛋白而设计
tips:
一般而言,对于基于全蛋白的2DE的蛋白组,得到新的标志物可能性很低(全蛋白鉴定蛋白有限,基本已做完,而且现在芯片很成熟)。
个人认为2DE比较让人感兴趣的一个方向是免疫沉淀得到低丰度蛋白再进行2DE。
不过好像做这个的不多,有一个参考是:
Kaboord, B. and M. Perr, Isolation of proteins and protein complexes by immunoprecipitation. Methods Mol Biol, 2008. 424: p. 349-64.