蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】差异蛋白质组学研究如何应用于发现...

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】差异蛋白质组学研究如何应用于发现...

@STAR@[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74483
精华 0
积分 464
帖子 506
信誉分 101
可用分 3456
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
1
 

【求助】差异蛋白质组学研究如何应用于发现...


目前已经通过蛋白质组学技术发现了一些蛋白质在疾病中表达显著增高,请问下一步如何验证这些蛋白或多肽具有诊断疾病的价值呢,急问,谢谢
顶部
cwcwcww[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 101434
精华 1
积分 311
帖子 277
信誉分 102
可用分 2191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2012-12-3
状态 离线
2
 

首先应该明确,蛋白质组学只是个工具,相当于个筛选模型,只不过筛选的是靶点,后续的试验验证、机制研究才是真正的科研所在,因此“急问”这个心态不好,先踏下心来思考。

第一步要做的,是大量的查阅文献!这些蛋白是否有报道?在哪些疾病流域?和你的目标疾病是否有相关性?

通过文献的查阅综合所有信息,对这些蛋白大概有了了解才能涉及后续的试验。比如这些蛋白是信号分子?受体?酶?不同的性质会导致试验的涉及千差万别。

具体试验,首先应该考虑WB或其他明确的试验手段验证筛选(蛋白质组学)的结果,因为有可能是其他原因导致的改变
验证确实改变了以后,可以考虑knockdown或者knockout该蛋白---overexpression该蛋白---knockout以后的rescue,这些都是最标准的验证目的基因和目标疾病关系的实验手段
如果这些还证实有关,在考虑进入体内甚至人上验证等等,后续就更多了

综上,最关键的是先踏下心来查文献,明确刚刚走了科研的第一步(当然如果是硕士着急毕业的另说。。。只能把这些写讨论里了。。。),后面的才是真正的工作。

供参考!祝好运!
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
3
 

1 WB验证你的结果(验证多少蛋白视财力,文献分析而定)
2 参照别人文献,分析蛋白可能涉及相关功能,两个选择:
a: 文献已报道,成功可能性大,但意义小
b:未报道,风险大,但意义也大
3 下游实验具体参照你选择蛋白而设计

tips:
一般而言,对于基于全蛋白的2DE的蛋白组,得到新的标志物可能性很低(全蛋白鉴定蛋白有限,基本已做完,而且现在芯片很成熟)。
个人认为2DE比较让人感兴趣的一个方向是免疫沉淀得到低丰度蛋白再进行2DE。
不过好像做这个的不多,有一个参考是:
Kaboord, B. and M. Perr, Isolation of proteins and protein complexes by immunoprecipitation. Methods Mol Biol, 2008. 424: p. 349-64.
顶部
ii077345[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108893
精华 0
积分 247
帖子 193
信誉分 100
可用分 1734
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
4
 

楼上说的免疫沉淀后再进行2DE,很难实现。
IP下来的东东很难达到2DE的上样量的,很难看到点。
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
5
 


QUOTE:
原帖由 ii077345 于 2013-8-30 15:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼上说的免疫沉淀后再进行2DE,很难实现。
IP下来的东东很难达到2DE的上样量的,很难看到点。

你试过嘛?我只是看到有几篇文章是这么做的,不过类似文章确实很少。
我觉得银染总比他们IP后1D考染好多了,传几个例子上来,有空多指点。
不过和帖子主题不符,版主原谅。


查看积分策略说明
附件
2013-8-30 15:49
70065089.jpg (67.47 KB)
 
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
6
 

IP+2D 例子2


查看积分策略说明
附件
2013-8-30 15:52
30973432.jpg (71.08 KB)
 
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
7
 

IP+2D 例子3


查看积分策略说明
附件
2013-8-30 15:53
65213983.jpg (74.04 KB)
 
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
8
 

IP+2D 例子4


查看积分策略说明
附件
2013-8-30 15:53
42375357.jpg (58.37 KB)
 
顶部