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标题:【求助】 2DE图横条纹严重

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发表于 2013-8-31 09:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 2DE图横条纹严重


如题
我做得是橡胶胶乳蛋白
1 主动水化 14hrs
2 100V 30' 缓慢
3 250V 30' 缓慢
4 500V 30’缓慢
5 1000V 30' 缓慢
6 10000V 4hrs 线性
7 10000V 60000Vhrs
8 1000V 任意时间
裂解液配方
7M UREA 2M THIOUREA 4%chaps 2mM TBP 0.2%biolyte
横条纹太严重了
望各位高手给分析下 不胜感激


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发表于 2013-8-31 09:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有一张 相同的样品
只是裂解液成分不一样
8M UREA 4%chaps 2mM TBP 0.2%biolyte
其他SDS-PAGE药品用的是同学的
怀疑是THIOUREA的问题 但是我同学用相同的THIOUREA
他们的图还可以
急啊
分析不出原因来


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发表于 2013-8-31 09:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能 上样量太大 盐浓度 也有可能太高
试着搭个盐桥
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发表于 2013-8-31 09:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上样不大 我做了对照
即使上100ug 没多少点也横条纹
盐浓度不高 升压很顺利
最高电压10000 电流最小为19uA 最大为39uA
纯化过的蛋白仍然也是这样子
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没良心55[使用道具]
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发表于 2013-8-31 09:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如图
1 2是为纯化的 3 4为用CLEAN UP纯化过的
其中1 3的LYSIS配方为7M UREA 2M THIOUREA 4%chaps 2mM TBP 0.2%biolyte
2 4的LYSIS配方为8M UREA 4%chaps 2mM TBP 0.2%biolyte
1 2为超声助溶
升压正常 4000V保持25000Vhrs
总之 横条纹仍然很严重


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发表于 2013-8-31 09:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ha111 于 2013-8-31 09:24 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

可能 上样量太大 盐浓度 也有可能太高
试着搭个盐桥

盐桥也搭过
结果仍然
我同学怀疑是不是盐桥造成横条纹
所以不是这个问题
主要问题不是盐离子
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发表于 2013-8-31 09:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可不可能是平衡问题呢
DTT OR IAA 失效
但是DTT在-20度保存 而且很臭
且都是BBI公司的
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=菓子=[使用道具]
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发表于 2013-8-31 09:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是不是聚焦的问题？多长的胶条啊
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发表于 2013-8-31 09:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 =菓子= 于 2013-8-31 09:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
是不是聚焦的问题？多长的胶条啊


7CM
之前2000VH也是一样
顺便问下
你是山东青岛的吗？？
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=菓子=[使用道具]
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发表于 2013-8-31 09:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

7cm胶条电压最高到4000V就行了，你这个忒高了。。。。。
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