小中大材料与方法1.1
仪器设备
Agilent1100高效液相色谱仪，包
括：真空脱气机、双元泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器（DAD）、荧光检测器（FLD）和化学工作站，美国Agilent公司；电热恒温干燥箱（最高温度350℃，控温精度±1℃），日本Yamato公司；高速
台式离心机（最大转速14000r/min），
德国Hettich公司；旋转蒸发器，德国IKA公司。
1.2试剂及配制甲醇、乙腈（色谱纯），美国Fish-er公司；NaH2PO4·H2O（分析纯），美国Sigma-Aldrich公司；硼酸缓冲液、邻苯二甲醛（OPA）、氯甲酸芴甲酯（FMOC）和17种氨基酸标准混合液，包括：丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、组氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙
氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸，Ag-ilent公司；色氨酸和内标戊氨酸，美国Sigma-Aldrich公司。HCl（优级纯）、巯基乙醇、NaOH（分析纯），北京化学试剂厂；水为双蒸水。
内标溶液配制：准确称取适量戊氨酸，用0.1mol/LHCl配制成浓度为50mmol/L的内标贮存液，临用时稀释。
氨基酸混合标准液的配制：准确称取适量色氨
酸，用0.1mol/LHCl配制成浓度为18mmol/L的贮
存液，临用时稀释。将不同浓度的17种氨基酸混合标准液与适当浓度的戊氨酸和色氨酸溶液按一定比
例混合，配制成浓度分别为4.5、45、225、450和1000μmol/L的氨基酸混合标准溶液（内标戊氨酸
浓度均为250μmol/L）。
冬虫夏草样品：分别产自青海省果洛州和玉树州、四川甘孜州、贵州铜仁市和西藏那曲县，由吉林大学生命科学学院提供。
1.3样品制备水解氨基酸样品制备按照参考
文献［7］
中样品制备项下样品酸水解法进行。
1.4
色谱条件色谱柱：ZorbaxEclipseAAAC18
柱，
75mm×4.6mm，3.5μm。流动相A：40mmol/LNaH2PO4·H2O溶液，pH=7.8。流动相B：乙腈/甲
醇/水=45/45/10（v/v）。流动相梯度洗脱程序：0.0～1.0min（B：0%），1.0～9.8min（B：0%～57%），9.8～10.0min（B：57%～100%），10.0～12.0min（B：100%），12.0～12.5min（B：100%～0%），
12.5～14.0min（B：0%）。流速：2mL/min。柱温：40℃。DAD检测波长：0～8.5min，紫外波长338nm（谱带宽10nm），参考波长390nm（谱带宽20nm）；FLD检测波长：0.0～8.5min（激发波长340nm，发射波长450nm），8.5～14.0min（激发波长266nm，发射波长305nm）。自动衍生程序：分别吸取2.5μL硼酸缓冲液和0.5μL标准溶液或样品水解液，
充分混合，静置30s；洗针；吸取0.5μLOPA充分混合；洗针；吸取0.5μLFMOC充分混合；吸取32μL水，充分混合；进样量18μL。
HPLC测定不同产地冬虫夏草中氨基酸的含量 都擦不多
