小中大【求助】转膜后丽春红染色无条带
各位战友,本人最近开始做western,但似乎很不成功。主要表现为:ECL发光、压片后几乎全是光板,偶尔有极其微弱的条带,前面实验证明一抗和二抗都没有问题。怀疑问题出在转膜上,主要表现为:转膜后丽春红染色观察不到条带。对于样品,经过BRADFORD法鉴定,蛋白浓度还很高的。经过电泳后,胶条经考马斯亮蓝染色也有明显的条带。转膜采用的是bio-rad湿转系统,转膜液配方:glycine 2.93g,Tris 5.8g,SDS 0.37g,恒压100V转移100分钟,目的蛋白分子量17KD,内参为GAPDH。marker采用fermentas的marker系统,marker在转膜后在膜上清晰显现,但是丽春红染色没条带。转膜后胶条经考马斯亮蓝染色也没有条带。
请各位大侠指导!小弟感激不尽!