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标题:[未解决]HPLC峰分不开，如何调流动相

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
iwangfang[使用道具]
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发表于 2010-4-9 10:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

HPLC峰分不开，如何调流动相

样品为两种未知中性物质，流动相乙腈：缓冲盐=6：4，缓冲盐PH=4.5，两种物质的峰分不开，应该如何调节流动相？

其中保留时间在51.60min与54.29min的为同一物质，但保留时间在49.91min的物质与其分离效果较差，如何可以提高其分离度？
谢谢！
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  • miracle   2010-4-9 11:46  可用分  +1   已有朋友回复您的问题！
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naren4545[使用道具]
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发表于 2010-4-9 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这种情况,调整比例是没用的,考虑更换溶剂和色谱柱吧,要不就彻底更换方法!
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  • miracle   2010-4-9 11:46  可用分  +3   谢谢群主提供建议！
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woaifou[使用道具]
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发表于 2010-4-9 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主，调节一下流动相的比例或流速试试看
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uwku58h[使用道具]
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发表于 2010-4-9 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
分离度确实挺差的，一般先调调流动相，不行的话就换细内径的柱子试一试。
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  • miracle   2010-4-9 11:47  可用分  +3   欢迎参与技术交流！
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aasle[使用道具]
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发表于 2010-4-9 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 iwangfang 于 2010-4-9 10:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
样品为两种未知中性物质，流动相乙腈：缓冲盐=6：4，缓冲盐PH=4.5，两种物质的峰分不开，应该如何调节流动相？
4114
其中保留时间在51.60min与54.29min的为同一物质，但保留时间在49.91min的物质与其分离效果较差，如何可以提高其分离 ...

分离度和N、K、a有关，先改变一下K、a,最简单就是改变一下流动相，K太大了，你用的是正相还是反相？改变一下流动相使a变大，K尽量小点，时间太长了。
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  • miracle   2010-4-9 11:47  专家分  +2   感谢您的帮助解答！
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haohaorenjia[使用道具]
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发表于 2010-4-9 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
为何同一物质会出现两个色谱峰，肯定不是同一物质。

光看到了色谱图，没有色谱条件，神仙也不知道怎么帮你提高分离度。建议楼主说清楚点，大家好帮你。

[ 本帖最后由 miracle 于 2010-4-9 11:47 编辑 ]
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发表于 2010-4-9 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知你用的是什么流动相?
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hplcangel[使用道具]
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发表于 2010-4-9 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道分析的是什么物质。是反相色谱么？出峰时间好晚啊。出峰这么晚都分不开。估计再调节流动相比例来分开的几率比较小。还是调节下PH。或者把出峰时间调早些。加点离子对试剂看看吧
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santa[使用道具]
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发表于 2010-4-9 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该把你用的什么柱子和流动相比例说明清楚吧！
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iwangfang[使用道具]
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发表于 2010-4-9 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
色谱条件：大连依利特ODS  C18柱 250mm*4.6mm   紫外可见检测器                                       
缓冲盐采用的就是庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾以及三乙胺，调PH=4.5，然后与乙腈以不同比例配制流动相，改变其配比，两种物质并不能得到有效分离，当以8;2配制流动相时，两种物质都在10min以内出峰，但情况基本与6;4的一样，两种物质无法分离。                                                                                               
改变流速看分离效果的依据是什么?
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