手性分析

本人做毛细管电泳拆分N-乙酰-DL-蛋氨酸的两个对映体，对氨基酸进行了衍生化，使其具有较大的紫外吸收，做了关于缓冲液Ph值的变化、α，β-环糊精浓度的变化、试了两个背景电解液，但就是不见两个对映体分开。请问大家有什么建议，谢谢。。

手性毛细管电泳拆分N-乙酰基保护的氨基酸，楼主都尝试了哪些运行缓冲液及其pH值呢？手性选择剂仅仅试验了α，β-环糊精吗？

系统地考虑，个人认为有如下一些实验参数需要考察优化：
1. 手性选择剂的种类及用量对分离的影响；
2. 缓冲液的pH值和浓度对分离的影响；
3. 运行电压；

chiral CE，手性选择剂有近乎决定性的影响，既然楼主试用了α-，β-环糊精，都未曾见明显拆分效果，个人建议，可以考虑试试 γ-环糊精，看是否有效？基于结构修饰过的β-环糊精，在手性分离中有广泛的应用，因此，个人强烈建议重点考察：甲基-β-环糊精(Me-β-CD)、羧甲基-β-环糊精(CM-β-CD)、羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)等手性添加剂对分离的影响。

另一方面，如常规的毛细管电泳法，考察磷酸盐、碳酸盐、硼酸盐等缓冲体系的分离效果。同时，也可以考虑在体系中添加十二烷基磺酸钠，胶束电动毛细管电泳法。。。

实验之前，以N-acetyl-amino acids、enantioselective、cyclodextrin、chiral CE、N-Acetyl-DL-Methionine等为关键词，多找相关文献，读读，会很有帮助的。

整个实验下来，一篇SCI的文章就出来了。。。呵呵

[ 本帖最后由 aa_tang 于 2010-4-25 20:33 编辑 ]

楼主，这个应该还是从分离方面找解决办法的，做拆分是有一定困难。

可以尝试不同缓冲液及添加剂啊，像金属铜离子，氨基酸等。不要仅局限于环糊精。

楼主，找文献看看吧！楼上群主大侠回答的很发好啊！！

这位大哥是专家嘛，哈哈
我也是做电泳手性拆分的，药大药分的，有时间我们交流交流，哈哈。

用β-CD类的拆氨基酸衍生物应该问题不大，buffer用磷酸盐体系就可以了，最关键是2个因素：选择剂的浓度和pH。
推荐用HP-β-CD，浓度尽量配得高些（至少40mM以上），可以考虑加甲醇增大HP-β-CD的溶解性和改善分离效果。

关毛细管电泳拆分对映体特别是通过添加环糊精的方法，我们一定要认识到手性分离与环糊精的种类和浓度、缓冲液的浓度和pH及分离温度、电压有关。考察队分离的影响一定要系统地考察，不能仅考察同一参数的一两个不同来评价某个参数的拆分能力。
故建议：(1)系统考察各参数对分离的影响；（2）排除衍生试剂对手性中心是否有影响。

考虑到环糊精的溶解性、分离机理等因素，建议使用改性的环糊精为拆分试剂，比如羟丙基-b-环糊精（HP-b-CD）、二甲基-b-环糊精（DM-b-CD）等。

考虑以下几点：
(1) 分离电压
(2) 环糊精浓度
(3) 被分离物质的浓度
(4) 缓冲溶液pH值、浓度

如果不经衍生，β-环糊精可以很容易将对映体分开，常用的硼砂缓冲即可，如果经过衍生，应考虑使用的什么衍生试剂，如果衍生试剂分子较大，可能β-环糊精不合适，而且这种情况下用金属离子可能也不太有效；如果衍生后极性减小，可考虑使用SDS和β-CD。