食品分析者

做细菌总数实验，生理盐水、培养皿、试管、琼脂培养液都消毒了，还在超净工作台做的实验，怎么做出来的空白对照老是有问题?是不是我的操作上有问题啊?请教各位说说实验过程中应该注意哪些问题啊?
太感谢了！

你可以做一次环境测试！
紫外灯杀菌，不代表无菌室就会一直处于无菌状态！
还有就是你的平皿和试管是怎么灭菌的？
是不是干热灭菌！干热灭菌160度维持2个小时！
你的培养箱也可以用酒精擦拭一下！

可能存在这几点问题：1、接种环没有烧；2、手没擦干净；3、有可能出现了新的菌种太耐高温了。

2楼说的很有道理

1 空白样不加样，仅倒入琼脂培养皿，观察是否带菌？
若有说明，倒培养基操作有误。
2 若没有，将琼脂培养皿置无菌操作台，做检验时，打开盖约2个样的周期，
若有菌说明无菌工作台有缺陷。
3 操作靠多练习，无捷径，，，，，，

其实楼主也应该测试一下培养箱的温度是否标准恒定 好像偏差一两度 对结果影响很大的~~~

平皿和试管用高压蒸汽灭菌，估计是灭菌没有灭充分，我有做过用高压蒸汽灭菌平皿和试管，结果没有灭充分，导致检测结果每个平皿都长了细菌，最后找原因，是平皿和试管用平皿筒和试管筒放进去灭菌，灭菌锅里的温度和灭菌时间是够的，就是筒里的温度不够，后来改用干热灭菌就没再出现这种情况了

楼主如果采用杀菌锅灭菌的话一定要在灭菌完成后将平皿放干燥箱烘干，否则平皿有可能会被污染

无菌室很多时候的日常清洁做的不到位的话，积累到一定程度检测就会有反应，一般首先应该进行彻底的清洁(包括超净台)，注意抹布(一般选用无脱落物的丝光毛巾)不要太湿，遵循拧至不滴水为止后进行清洁，这样表面不易存留有积水污点，然后按常规使用前清洁消毒程序(应该是经过验证效果确认的)进行操作，然后进行微生物、沉降菌检测，检测合格后使用(实际中一般不会等到结果出来)，若担心清洁消毒效果，可再加上相应的消毒措施。

从大的角度讲，其实应该分析无菌室环境污染的原因，比如假如是高效过滤器泄露了或者说没有及时清洁，那你后续的工作做得再好也不会有很好的效果。那就需要更换高效过滤器(新的应进行完整性试验)或者说进行清洁，然后检测环境，合格后使用。

“但是新的消毒锅，会有从内胆底部开孔的，其排气口会在消毒锅底部，这样我们在盖子上就不会看到软管，而设计人员脑袋也会缺一根筋，居然还在盖子上开2个阀（排气阀、安全阀），误导操作人员”
——空气的比重比水蒸气大，空气当然从底部排走，用软管的目的也是抽走底部的空气。