小中大正在做GST-pull down,请教以下问题：
1，细菌裂解液和细胞裂解液的选择应该注意什么？我的bait蛋白目前研究不是激酶，prey蛋白可能是激酶有酶活性，这样的话蛋白裂解液应该如何选择？希望给推荐一下！
2.在细菌中表达bait蛋白，诱导的量不太多，时间IPTG浓度温度条件都摸索过了，3-6小时差别不大，是不是形成了包涵体？如何优化条件？
3.我用的是细胞裂解液与GST融合蛋白做binding实验，请问有没有较好的protocol？我们实验室多数是做TnT做体外的pull down,参考不多，亟待解决。
4.接问题3，GST融合蛋白与细胞裂解液孵育的体系不知如何着手，用多少的蛋白裂解液合适呢？或者说多少的GSTbeads和多少细胞裂解液做结合？需要测蛋白浓度吗？
谢谢！！
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1，BUFFER 可以多试几种，毕竟有些BUFFER会对相互作用有影响，很难判断，最好多试试
2，如果不想要包涵体，可以试试换载体或者宿主菌，不同诱导起始OD。
3，关键是不要影响蛋白间的相互作用，而非与GST的作用
4，蛋白浓度可以试试，做一个非PD的对照。
