小中大【求助】MBP蛋白纯化
各位做蛋白纯化的前辈们,偶是做蛋白纯化的新手。花了很长的时间去诱导蛋白在上清中表达,遇到很多的问题,然后到了纯化这一步,又遇到了棘手的问题。望请各位指点。
我的蛋白的标签是MBP,买的是NEB的amylase resin 由于说明书给的是纯化很大量的蛋白,因此后面的纯化步骤就根据实验室的师兄自己摸索,但是纯化之后又不就是结合的蛋白的量很少,又不就是有非特异的条带。
图片显示的是两个蛋白。最左边是Marker,从左到右分别是 超声波的上清液,与树脂结合之后洗脱下来的上清液,用buffer洗脱树脂溶液,加入麦芽糖的洗脱液。一共洗脱了三次。
然后左边的蛋白看起来结合不上树脂啊。
求各位前辈给些意见。