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标题:【求助】亲和层析中sepharose的问题

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发表于 2013-10-9 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】亲和层析中sepharose的问题

最近要用到亲和层析，老板让我们自己制备bule琼脂糖凝胶，还给了一篇文献（附后），我和实验室的师兄讨论认为其实亲和应该是贵在sepharose的活化上，既然他有限的使用寿命，能不能不用进口的sepharose呢？用普通的琼脂糖可以吗？你有这方面的经验吗？附后的文献用普通的琼脂糖做的，你认为可行吗？如果真的可以那应该可以降低使用的成本了，我可以这样的理解吗?
谢谢你回答我的问题，小妹谢谢先！！！
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发表于 2013-10-9 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想应该可以，如果你在亲和层析时不需要用到极端的PH条件和较高的压力的话，一般sepharose CL型的化学稳定性较好，而sepharose FF型的机械性能较好。如无特殊要求国产凝胶应该可以。
另外你老板给你的文献中并没有介绍blue琼脂糖凝胶的制法。
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发表于 2013-10-9 14:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们的想法是想用普通的琼脂糖来做，你有这方面的经验吗？能做成功吗？
会有什么样的影响？会影响纯化？
能不能用国产的凝胶G－25，或者G－11代替sepharose或者普通的凝胶来作啊？
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发表于 2013-10-9 14:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
脱水
琼脂糖凝胶:是从琼脂中分离出来的天然凝胶,由D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖交替结合而成.其商品名因生产厂家不同而异,如Sepharose(瑞典),Sagavac(英国),Bil-Gel(美国),每一品名又有不同的型号.琼脂糖凝胶的优点是凝胶不带电荷,吸附能力非常小.主要用于分离分子量40万以上的物质,如核酸,病毒等.

这种说法对吗？
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发表于 2013-10-9 14:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
文献中的方法过于粗糙,因为通常琼脂糖凝胶都是球型的,需要先融化,然后乳化分散,再清洗,筛分,这样才得到琼脂糖凝胶,不是球型比表面积小,容易碎,流速不快,而且琼脂糖本身的刚性也决定了凝胶的刚性,所以并不是所有的琼脂糖都适合用于制备琼脂糖凝胶,当然如果是实验室这样也是可以的.
琼脂糖凝胶很少单独用于分子筛纯化,当然通常都是纯化大分子蛋白核酸等,但是更多作为基质用于合成离子交换,疏水,亲和等填料.
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发表于 2013-10-9 14:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

文献的方法貌似也是这样啊，融化,乳化分散,再清洗,筛分（20－40目），我想知道的是，能有替代的国产sepharose吗？既然亲和重复使用
的频率不高，那么为什么不能用更廉价的代替呢？可以降低生产的成本不是很好吗？
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发表于 2013-10-9 14:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是的，但是这样做的颗粒还是不均匀，因为没筛分，而且做起来很麻烦，你可以用国产的琼脂糖凝胶代替没问题，别的材料都不能做到和琼脂糖凝胶一样好
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发表于 2013-10-9 14:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1可以用国产的琼脂糖凝胶代替没问题

可以具体一点吗？那种牌子的？那种型号的？

2 但是这样做的颗粒还是不均匀，因为没筛分，

颗粒不均匀会有什么影响？因为没有晒分，过20－40目的筛子不可以吗？

难道有专门的筛分工具？
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发表于 2013-10-9 14:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

cuturl('www.wsac.cn') 有国产的琼脂糖凝胶,也有现成的你需要的填料.选择琼脂糖凝胶6B FF就可以,也可以买现成的蓝色琼脂糖凝胶即可.20-40目做出琼脂糖凝胶颗粒太大,不筛分的话影响流速,颗粒大载量就会降低.
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 小中大

你所谓的国产的琼脂糖凝胶的价格，我看到了，怎么比国外sepharose的价格都要高啊？难道还可以便宜啊？
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