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标题:【求助】蛋白保存

鸽子不哭[使用道具]
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发表于 2013-10-10 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白保存


我纯化出一个重组蛋白，要常用，请问保存在什么条件下（温度？，蛋白液中要加入什么试剂？等）蛋白保存可取用的次数。
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jujuba[使用道具]
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发表于 2013-10-10 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没有具体规范，大体原则是：分装保存，温度越低越好，冻融次数越少越好。

至于添加什么，要取决于下一步实验要求。
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IAM007[使用道具]
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发表于 2013-10-10 14:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

根据蛋白的类型选择缓冲液的类型，合适的PH值，合理的离子强度，表面活性剂，冰冻保护液如甘油，是否需要还原剂（如DTT）等。
一般而言大多数蛋白在冷冻条件下可以长期保存，但也有部分蛋白在冰冻的条件会出现在失活，变性的情况，这种情况下只适合4度保存了。
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lxh031[使用道具]
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发表于 2013-10-10 14:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 IAM007 于 2013-10-10 14:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

根据蛋白的类型选择缓冲液的类型，合适的PH值，合理的离子强度，表面活性剂，冰冻保护液如甘油，是否需要还原剂（如DTT）等。
一般而言大多数蛋白在冷冻条件下可以长期保存，但也有部分蛋白在冰冻的条件会出现在失活，变性的情况，这种 ...

请问蛋白的类型指的是什么？
一般而言，对多数蛋白，可以－80度后冻融几次不至于很严重地影响其活性？
谢谢！！
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idea2011[使用道具]
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发表于 2013-10-10 14:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白有亲水的，疏水的，比如说膜蛋白大多数是疏水的，
至于-80度多次冻融后的失活，更多的与你的缓冲液有关的。适当的缓冲液，很多蛋白可以多次冻融的，缓冲液不佳也可能一次就大部分失活了。当然并非一定要-80才能长久保存。举一个例子，某一蛋白在含有50%的甘油缓冲液，其在-20度时，溶液处理非冻结状态，仍为液态，但却可以长久的保持生物活性。
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发表于 2013-10-10 14:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同意楼上的说法，-80度冻融失活，可以考虑提高蛋白浓度。
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avi317[使用道具]
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发表于 2013-10-10 14:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白保存应根据对活性的要求及蛋白的种类而定:
抗体:除非一些公司特别要求-20℃冻存,一般4℃可稳定一年(无菌,如加叠氮钠),因为抗体是一种具有非常稳定结构的蛋白;
要求具有活性的蛋白,最好根据需要小量保存4℃(一周）、-20℃(一个月)、-80℃(六个月)、液氮（基本无限期），反复冻融会导致诸多不良后果，如聚集、修饰、降解、污染等（取决于蛋白浓度、缓冲液成分及蛋白本身的特点）；
冻干是一种很好的长期保存法（如条件具备），在大多数情况下可以很好地保存蛋白的活性，但不适于某些蛋白（因有些蛋白对冻干重溶时必然产生的盐离子浓度的急剧变化反应不佳，其活性会永久丧失（应具体对待，尚无规律可循））。
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one[使用道具]
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发表于 2013-10-10 14:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白是加了上样Buffer煮熟了保存还是直接保存呢？
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baidukk[使用道具]
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发表于 2013-10-10 14:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白是加了上样Buffer煮熟了保存还是直接保存呢？

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直接保存的用途比较多，加了Buffer煮后变性就只能跑电泳了。
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u234[使用道具]
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发表于 2013-10-10 14:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加Buffer煮熟的蛋白放-20度能保存多久？
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