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标题:【求助】SDS电泳时前方有宽约0.5厘米的蓝色区域...

hyuu[使用道具]
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发表于 2013-10-10 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS电泳时前方有宽约0.5厘米的蓝色区域...

SDS电泳时前方有宽约0.5厘米的蓝色区域，且呈油状，试剂重新配过。


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2013-10-10 15:03
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yonger[使用道具]
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发表于 2013-10-10 15:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
电泳时间不够
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hyuu[使用道具]
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发表于 2013-10-10 15:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 yonger 于 2013-10-10 15:04 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
电泳时间不够

什么意思？是要让蓝色区域跑出去吗？
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大脑门儿儿[使用道具]
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发表于 2013-10-10 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该是你的loading buffer里的组分，标志着电泳的前沿，防止目的蛋白跑出去，没关系的。
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hyuu[使用道具]
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发表于 2013-10-10 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可是跑空胶也会出现这个区域啊。做胶的玻璃板是用洗洁精洗过，乙醇冲洗晾干。这样做有不对么？
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2013-10-10 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我自己的经验，应该是你的蛋白样品中有酯类物质，比如说一些消化腺的样品等多会出现这种情况，它们本身会偏黄色，然后还会和溴酚蓝以及考马斯亮蓝结合，以至于会显出各种颜色。楼主是否使用的蛋白粗提物或者是直接煮了组织上样？
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hyuu[使用道具]
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发表于 2013-10-10 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 wu11998866 于 2013-10-10 15:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我自己的经验，应该是你的蛋白样品中有酯类物质，比如说一些消化腺的样品等多会出现这种情况，它们本身会偏黄色，然后还会和溴酚蓝以及考马斯亮蓝结合，以至于会显出各种颜色。楼主是否使用的蛋白粗提物或者是直接煮了组织上样 ...

我用的是细胞的蛋白粗提物。可是不加样的空胶也会跑出这块区域。这是跑胶过程中拍的。


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wu11998866[使用道具]
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发表于 2013-10-10 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 hyuu 于 2013-10-10 15:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


我用的是细胞的蛋白粗提物。可是不加样的空胶也会跑出这块区域。这是跑胶过程中拍的。

是的，我自己的样品也有这种情况，再比如你最开始贴的那张图，在marker下方也有这种颜色。我个人推测，可能是因为这些分子非常小，很容易扩散而不受凝胶孔径的制约，导致每个泳道里面都有。还有一个问题不知道楼主注意到没有，就是这些分子结合溴酚蓝的能力很强，在上图中，溴酚蓝的位置在marker最下方的那条蓝带上，但是在样品区溴酚蓝呈现弥散的带状，而且在marker的溴酚蓝位置之后。我思考这个问题也很久了，以上是我的个人观点，和大家讨论。
再有，楼主应该是用的12%或者10%的胶吧，我发现如果用15%的胶，情况会改善不少，这个区域在跑胶的时候观察不到，染色后离样品区很远（远在10kd以外的位置）。如果楼主只是不希望这些东西干扰后续实验，比如western等，可以改用15%的胶；如果一定要去掉这些成份，我想只能进一步纯化样品了。
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hyuu[使用道具]
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发表于 2013-10-10 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

15%的确实能跑出所有带，可是为什么会有这块区域啊，为什么不加样品跑胶也会有这个区域？
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owanaka[使用道具]
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发表于 2013-10-10 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

以前经常见这个宽的蓝色条带，也甚为纠结！
通过延长电泳的时间，发现条带不见了！这条带不影响结果的分析，也不影响wb的转膜，总结起来这就是loading buffer中的溴酚蓝的作怪！
呵呵
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