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标题:【求助】WB方面求助

kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2013-10-10 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】WB方面求助


请问WB时整块膜都发光是什么原因啊？非常感谢！
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911[使用道具]
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发表于 2013-10-10 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是WB新手，帮你分析下原因哈：
1、没有封闭或者封闭的不好；
2、一抗（或二抗）没有洗干净；
3、发光液孵育后，发光液没有用滤纸吸干，且用保鲜膜包得不够严密，导致背景太强；

希望对你有用：）
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idea2011[使用道具]
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发表于 2013-10-10 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

二抗浓度对实验有什么样的影响呢？谢谢！
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2013-10-10 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那我的这块膜再清洗过后，是否还可以用呢？非常感谢！
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dog002[使用道具]
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发表于 2013-10-10 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

抗体的浓度高，会导致条带很强，一般不会导致整张膜都有信号。如果不是发光液导致的，现在再清洗应该没有很大用。如果你的膜一直保存在洗膜缓冲液中，可以试一下用stripping buffer把抗体都洗掉，再重新封闭和孵育抗体，或许有用。
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2013-10-10 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那么膜与发光液的接触时间长短会对实验有影响吗？
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2013-10-10 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

跑电泳时，如何把胶底下的气泡排尽？
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2013-10-10 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

测beta-actin时，最后得到的胶片为什么什么都看不到呢，是什么原因呢?在我做的上一天一个师兄也是得出同样的结果。
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Tooooom[使用道具]
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发表于 2013-10-10 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 QQ

 小中大
路过，看看，学习一下
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2013-10-10 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

和以上的操作基本一样测另一种蛋白，且是同时进行的，在该蛋白的膜上却是整块膜都发光，这又是为什么呢？当跑电泳时，已经跑到底部，可蛋白间

距还是很小该如何处理呢？
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