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标题:【求助】免疫老鼠制抗体需蛋白质的量

qumm1985[使用道具]
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发表于 2013-10-12 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】免疫老鼠制抗体需蛋白质的量


用原核表达出的一蛋白，想免疫老鼠制多抗，不知用多大量纯化的蛋白才够。请大家指教。还有能否将具体操作告知，不胜感激。
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发表于 2013-10-12 12:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

免疫老鼠制多抗？
一般是免疫兔子制多抗，因为老鼠的血清太少了。

免疫的蛋白量根据你所选用的方案有关，目前各个实验室的用量都不是很一致。大概在200ug--1mg（兔）之间，太小免疫性低，太大容易引起免疫耐受。
按800ug计算，免疫3次，2只兔，二免剂量减半的话，大概需要4mg蛋白。
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2013-10-12 12:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
只是觉得兔子不好养，怕挂了。难道免疫老鼠不行吗？谢谢指教。
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发表于 2013-10-12 12:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一直老鼠才能收多少血？几毫升而已。。。
一只兔子收得好可以 收到100毫升血，40--50毫升血清。。。
没什么不好养的，可以多免疫几只。
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2013-10-12 12:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可是那要好多蛋白啊，要纯化好久哦。我制抗体的目的是做免疫组化，是不是纯化的蛋白越纯越好，我现在是过柱纯化，有杂带，后拿过柱的样品跑PAGE，然后挖胶，做电洗脱。这样要得到4mg蛋白要做很久呢。哎 痛苦中。
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发表于 2013-10-12 12:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

当然是越纯越好，但是也要考虑性价比，如果过柱纯化后杂带不是特别多，可以考虑直接免疫，可以减少蛋白损失。而且，不纯的成分主要是细菌的成分，和免疫组化的组织同源性低，影响不大。
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发表于 2013-10-12 12:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果你纯化后，抗原纯度很高，且抗原的免疫原性较强，免疫小鼠剂量２０ug就行。但我觉得你制备的抗原纯度还达不到这个要求，建议你50-200ug免疫。
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2013-10-12 12:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是我纯化的蛋白，第1泳道是Marker，2是溶解的包涵体，3是Ni柱纯化之后的，4-10是电洗脱纯化的。其中8，9，10有杂带。想请教一下这种是否可以做抗体。我做多抗是用来做免疫组化的。谢谢
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发表于 2013-10-12 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用ni柱纯化到这个效果是很好了。。。
放心大胆的去免疫吧。。。
羡慕。。。
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2013-10-12 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最后三个泳道有杂带，也可以免疫吗？
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