前天做氯霉素的含量测定，用2010版的新方法检测，可是总是不出峰，，请教大家帮忙解决。在线等。
氯霉素检验方法：
色谱柱：5um，4.6*200mm，C18柱
流动相：0.01mol/L庚烷磺酸钠混合溶液（取磷酸二氢钾6.8克，用0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至2.5）作为流动相。
检测波长为277nm。
对照液：称取氯霉素对照品适量，用流动相溶解并稀释至0.1mg/ml。
样液同上。
取20ul进样检测。
谢拉，在线等。

[ 本帖最后由 ctc8423 于 2010-5-10 20:38 编辑 ]

还请大家帮忙啦！

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如果方法没有问题的话,你就要找找系统的问题了.

比如流速压力正常吗?进检测器了吗?信号线接好了吗?

你可以用以前正常的产品方法做一下,看看是哪里出了问题.

不出峰的原因是比较多的,慢慢一个排查,但是也简单的

楼主，这个流动相没有有机相？

庚烷磺酸钠是做离子对试剂吧，感觉你的目标物结构比较复杂，用单单的甲醇和水不能出峰吗？

流动相：0.01mol/L庚烷磺酸钠混合溶液（取磷酸二氢钾6.8克，用 0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至2.5）作为流动相。

没有有机相？

005《中国药典》氯霉素含量测定项下：

    色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅碗键合硅胶为填充剂；以含0.1%庚烷磺酸钠的溶液（取0.1%庚烷磺酸钠溶液500ml与二甲基甲酰胺5ml、冰醋酸0.5ml，混匀）-乙腈（75：25）为流动相；检测波长为272nm。氯霉素片、氯霉素胶囊、氯霉素眼膏、氯霉素滴耳液和氯霉素滴眼液。

2005版药典上有有机相而楼主提供2010版没有

是的，我也是这么想的，怎么就没有有机相呢？氯霉素分子吸附在色谱柱上，而且氯霉素微溶于水，没有有机相，怎么把氯霉素分子洗脱下来呢？今天按2005版做了，峰型很好，理论塔板12000，含量99.48%和99.74%，平均99.6%,RD=0.2%。

药典我没看过，不过对于检测方法感到很疑惑：

色谱柱选择没有问题；
氯霉素并非强极性氨基化合物，流动相使用烷基磺酸盐是何目的？
从氯霉素的分子结构来看，氯霉素没有解离基团，水溶性并不高，用甲醇+水或乙腈+水作为流动相即可，无需添加盐、酸、碱，有机相含量处于30%~50%之间。检测波长280 nm左右。