【求助】大家看看，我这图，是不是核酸干扰啊

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标题:【求助】大家看看，我这图，是不是核酸干扰啊

11_hjx[使用道具]
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发表于 2013-10-17 15:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这是我的牛肉全蛋白电泳图，在上样口处，有蛋白，这是不是核酸干扰啊？？还有就是样品条带下端，会比上端窄，请大侠指教啊！！

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2013-10-17 15:07

77607155.snap.jpg (63.85 KB)

greenbee[使用道具]
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发表于 2013-10-17 15:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不像是有核酸干扰，感觉是你的胶没有凝好，或者你上样的时候是一隔一道上样，而且中间为空白道，什么都没上~~
上面的浓缩胶应该是破了吧，上样口处应该是沉淀，可能是你高温(煮沸)变性，而且变性上样缓冲液里以2-ME为主，高温的过程中很容易将这些还原剂氧化，不能充分使蛋白去折叠，从而产生沉淀，上样时又没有离心，就会积累于上样口，出现所谓的“鬼影”~~

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发表于 2013-10-17 15:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不像是有核酸干扰，感觉是你的胶没有凝好，或者你上样的时候是一隔一道上样，而且中间为空白道，什么都没上~~
上面的浓缩胶应该是破了吧，上样口处应该是沉淀，可能是你高温(煮沸)变性，而且变性上样缓冲液里以2-ME为主，高温的过程 ...

谢谢啊，我确实是隔一个上一个样，不过我其实在煮沸前是有离心的，出现这个上样口沉淀，正常吗？？有没有可以解决的方法啊，因为我这个蛋白样，是要用来做双向的呢，担心沉淀影响聚焦啊，其实我以前的电泳图，也出现过，越往下越窄，不知道这个是什么现象啊？？请指教啊

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发表于 2013-10-17 15:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

有的类似这样，在底部出现这个弧状，有的则是变窄，不知道可以解释这个现象吗？？

附件

2013-10-17 15:08

54856136.snap.jpg (15.23 KB)

greenbee[使用道具]
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发表于 2013-10-17 15:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

谢谢啊，我确实是隔一个上一个样，不过我其实在煮沸前是有离心的，出现这个上样口沉淀，正常吗？？有没有可以解决的方法啊，因为我这个蛋白样，是要用来做双向的呢，担心沉淀影响聚焦啊，其实我以前的电泳图，也出现过，越往下越窄，不知道 ...

这个应该没有太大影响，至多就是样品没有完全变性，有少量损失而已，如果你感觉对你的结果有影响的话，那就在变性结束再加适量的DTT或者2-ME，如果你做双向的话，推荐你用DTT，就是变性的上样缓冲液里就用含有DTT的，好像2-ME更容易出现这个现象；
如果沉淀了，那肯定会影响聚焦的；越往下越窄是你的电压偏高，两边泳道空载或者加样差距较大的时候更容易出现；可以把电压调低一些试试，然后两边尽量不要空，如果不加样就加大致相同的Loading Buffer

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发表于 2013-10-17 15:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有的类似这样，在底部出现这个弧状，有的则是变窄，不知道可以解释这个现象吗？？

你用的六一的电泳仪吗？

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小中大

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原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

这个应该没有太大影响，至多就是样品没有完全变性，有少量损失而已，如果你感觉对你的结果有影响的话，那就在变性结束再加适量的DTT或者2-ME，如果你做双向的话，推荐你用DTT，就是变性的上样缓冲液里就用含有DTT的，好像2-ME更容 ...

谢谢啊，从这个图上看吗，觉得有哪些需要进一步改进的吗？？

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发表于 2013-10-17 15:11 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你用的六一的电泳仪吗？

不是6.1的啊，我有好多图，都出现那样的弧形状的，不知道啥原因，我想是不是什么东西干扰蛋白样品了？？谢谢啊

greenbee[使用道具]
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发表于 2013-10-17 15:15 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

不是6.1的啊，我有好多图，都出现那样的弧形状的，不知道啥原因，我想是不是什么东西干扰蛋白样品了？？谢谢啊

下面出现拱起来的现象不是污染，如果核酸污染（一般是DNA的污染，因为RNA很容易降解掉）那条带会有点呈现V字形的趋势；
而你的是整块胶中间往上拱，以前用六一的总会这样；既然这样那你就检查一下你的电泳液吧，看看离子浓度是否合适，不要过高了……

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发表于 2013-10-17 15:19 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

下面出现拱起来的现象不是污染，如果核酸污染（一般是DNA的污染，因为RNA很容易降解掉）那条带会有点呈现V字形的趋势；
而你的是整块胶中间往上拱，以前用六一的总会这样；既然这样那你就检查一下你的电泳液吧，看看离子浓度是否合 ...

恩，非常感谢啊，你说的V字形，是不是说，就是底部有点尖的样子呢》》？就是整个泳道，下面比较尖，是这样的吗？

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