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标题:【求助】超滤和过滤技术答疑园地:有问尽管来提

njkph[使用道具]
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【求助】超滤和过滤技术答疑园地:有问尽管来提

膜分离是在20世纪初出现,20世纪60年代后迅速崛起的一门分离新技术。膜分离技术由于兼有分离、浓缩、纯化和精制的功能,又有高效、节能、环保、分子级过滤及过滤过程简单、易于控制等特征,因此,目前已广泛应用于食品、医药、生物、环保等各个领域。康宁生命科学的过滤、超滤产品在生物医学及制药研究领域有着及其广泛的应用,适合药品及生物制品的澄清、分离、纯化和浓缩等各个环节。

本人有多年的膜过滤技术经验,受丁香园和Corning(康宁中国)公司委托,特开超滤和过滤技术答疑园地,对站友们提出的问题给予解答,希望能够和大家相互学习,共同进步。

任何与超滤和过滤有关的实验问题和产品问题,大家尽管在此提出,本人尽力解答,也欢迎站友们来参加讨论。
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tuomu45[使用道具]
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请问可不可以将微生物的膜转运蛋白分离并提纯?怎样才能得到非常好的结果?谢谢!
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我想请教在用超滤膜进行血浆蛋白结合实验时,离心机转速在12000rpm时,血浆不能完全滤过,该采取怎样的方法进行改进?我用的超滤管是30k的
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能否根据膜材质的不同将过滤的物质分类列表,因为据我所知,有些溶剂如DMSO会溶解某些材质的滤膜。这样将来用得时候只要对照列表就知道过滤时选取相应的滤膜就行。
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请问可不可以将微生物的膜转运蛋白分离并提纯?怎样才能得到非常好的结果?谢谢!

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感谢您在开题后半小时就关注到该论题!
膜分离技术的条件是膜孔径的大小,该技术是基于膜孔大小对物质进行分离的一种方式,是随着科学技术的发展,近年来日益兴起,并不断发展完善的一门技术。现如今该技术在生命科学领域已经达到非常重要的地位,具有极大的神秘魅力,引发无数的科学技术工作者投身于此。
对于特定的分子量的微生物的膜转运蛋白--膜转运蛋白会因为功能的差异有很多种,所以需要特定--我们可以借助膜技术进行分离纯化,但是膜方法的分离毕竟是粗纯,进一步的纯化需要借助更精细的方法--Chromatography (层析)方法,甚至层析的组合加上膜分离以及其他方法的组合去完成--这就是所谓的下游技术。
想得到更好的结果,需要考虑的因素,除了最重要的分子量的选择外,还需要考虑膜分离时候的条件,比如样品的处理,膜分离时候的跨膜压力,其他还有温度,膜材质的选择。
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我想请教在用超滤膜进行血浆蛋白结合实验时,离心机转速在12000rpm时,血浆不能完全滤过,该采取怎样的方法进行改进?我用的超滤管是30k的

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我想您测定血浆蛋白结合率,是用某种药物或者活性成分和血浆蛋白在一定条件下,结合一段时间后,然后用超滤膜把小分子的游离药物或活性成分(未结合部分)离心分开,然后测定含量并进而计算结合率的实验。
该实验中膜上应该是和血浆蛋白结合的结合物,血浆蛋白因为分子量大不会离心下去。那么我猜您说的“血浆不能完全滤过”应该是血浆中的液体成分不能完全虑过,那么还有一些游离药物活性成分不能离心下去,所以无法计算。
我的建议是:
1,可以用更稀浓度的血浆液有利于离心,离心后再次加入缓冲液洗滤;
2,选择合适的分子量的膜;
3,增加压力。
供参考,祝成功!
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QUOTE:
原帖由 小游abc 于 2013-10-25 19:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

能否根据膜材质的不同将过滤的物质分类列表,因为据我所知,有些溶剂如DMSO会溶解某些材质的滤膜。这样将来用得时候只要对照列表就知道过滤时选取相应的滤膜就行。 ...

您给出一个很好的建议!
这个问题归属于化学兼容性的问题。
顺着您的问题,我把过滤(超滤)膜使用选择时候需要考虑的因素list如下:
1,分子量大小;Vs蛋白形状类型(球蛋白,纤维蛋白等) Size, 可以参考开题附件“过滤指南”里面的P1表1和P14表3;
2,蛋白吸附;Adsorption可以参考开题附件“过滤指南”里面的P1表2;
3,材料溶出; Extractable, 一般研发时候不在意,但是由研发转入生产的时候需要考虑;
4,化学兼容性:Compatibility 可以参考开题附件“过滤指南”里面的P3表3和P17表6;
5,样品量和流速,影响因素很多:可以参考开题附件“过滤指南”里面的P3表4和P15表4及其前文所述诸多因素;
6, 离心力:可以参考开题附件“过滤指南”里面的P16表5.
综合这些因素,您就可以优化选择康宁的超滤器。各种超滤器特点可以参考开题附件“过滤指南”里面的P5表5和P14表2.
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聚醚砜膜不能高压,那么酒精消毒是否会彻底?有没有细点的指导,比如浸泡的时间,如果需要无菌,不高压灭菌是否影响消毒效果?
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我想请教在用超滤膜进行血浆蛋白结合实验时,离心机转速在12000rpm时,血浆不能完全滤过,该采取怎样的方法进行改进?我用的超滤管是30k的

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这个实验我当时做过,楼主所说的问题确实存在,如果加大转速或延长时间的,会使血浆蛋白的温度升高,对实验产生很大的影响,所以如果有能力的话,可以采用低温高速离心机,保证结果的准确。当时我的实验室地龙蛋白,稀释确实是一个不错的方法,但是可能会使你的实验结果中的药物不易检出,小于最低限。
我觉的如果材料足够的话,可以选用平板膜,时间可以很大的节约,而且效果相当好。但由于生物实验,所得样品相当宝贵,所以这个方法只适合其他药品的制备。
离心超滤对膜管得选择也很重要,可以试一下,10k和1k,测定蛋白的保留率,选择合适的膜管。
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caihong[使用道具]
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楼主所说 “超滤”和心脏手术中体外循环的“超滤”是否同一概念?如果不是,其各自定义说什么?
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