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标题:【求助】多糖纯化后醇沉无沉淀

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发表于 2013-10-25 20:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】多糖纯化后醇沉无沉淀


水提醇沉一种植物多糖，50度加温复溶，用大孔吸附树脂AB-8，37度24小时振荡除色素，然后用0.45的滤膜除菌，用5000分子量的超滤膜包去除小分子和部分色素，浓缩到非常小的体积，4度过夜醇沉竟然什么都没有~~没有沉淀。
我以上的处理过程不应该有什么问题吧~~为什么没有沉淀呢？？
请各位高手指教！~~~~
纯化过程无限挫折！！！！郁闷死了
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发表于 2013-10-25 20:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1. 尝试用搅棒摩擦容器壁形成晶核
2. 如果还是没有，能不能查到目标物的溶解度，多糖的量是否足够多
3. 目标物是不是在纯化过程中被吸附、滤除、分解（pH=?）
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发表于 2013-10-25 20:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 101010 于 2013-10-25 20:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
1. 尝试用搅棒摩擦容器壁形成晶核
2. 如果还是没有，能不能查到目标物的溶解度，多糖的量是否足够多
3. 目标物是不是在纯化过程中被吸附、滤除、分解（pH=?） ...

我是用2g溶于1L水。不少了吧~~
ph一直是没变吧~~溶液里除了粗多糖之外一直没加过东西。
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发表于 2013-10-25 20:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
摩擦器壁还是没有吗?　
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发表于 2013-10-25 20:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 101010 于 2013-10-25 20:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
摩擦器壁还是没有吗?　

没有，只有想碎屑一样的东西。我觉得我放的多糖量很多呀~~怎么会这样呢~那步出的问题？
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jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2013-10-25 20:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用大孔吸附树脂AB-8，37度24小时振荡除色素，

是否保证多糖在树脂上没有吸附损失？
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发表于 2013-10-25 20:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用5000分子量的超滤膜包去除小分子和部分色素
以我的经验，超滤膜包的损失还是很大的，如果你的样品本来就不多，。。。。。。。
你可以试试透析袋，虽然慢一点，但是不会有死体积的损失
另外你最开始水提醇沉得到的多糖是否测过多糖含量？不会是蛋白、色素啊之类的占有太大比例吧？
鉴于你的步骤太多，都做完了很难找到出问题的步骤，建议你每一步做完都测一下多糖含量，这样很快就能找到出问题的步骤
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发表于 2013-10-25 20:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 jiushikeshui371 于 2013-10-25 20:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

用5000分子量的超滤膜包去除小分子和部分色素
以我的经验，超滤膜包的损失还是很大的，如果你的样品本来就不多，。。。。。。。
你可以试试透析袋，虽然慢一点，但是不会有死体积的损失
另外你最开始水提醇沉得到的多糖是否测 ...

大孔吸附树脂除色素，用苯酚硫酸法测，多糖损失量大约50%。我把膜包滤出来的液体用苯酚硫酸法测没有颜色反应（我没加热、没用紫外测）。
谢谢您的建议，我再做一遍，看看到底问题出在哪了。
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发表于 2013-10-25 20:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
透析袋我用过，效果还没有超滤好呢~~我觉得可能是都变性了，因为一透就三天。透析之后醇沉也什么都没有，而且透析之前我还没用大孔吸附树脂去色素。
问题会不会出在多糖上，会不会苯酚硫酸测得多糖不准，粗提物中本来就没有多糖呢~~
我用苯酚硫酸测粗提物中约45%的糖。针对粗提物我用1-萘酚法测有紫环反应，紫外全波长扫描在203nm左右有峰，没有其他的峰。蛋白反应为阴性。
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jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2013-10-25 20:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 =pkchen= 于 2013-10-25 20:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
透析袋我用过，效果还没有超滤好呢~~我觉得可能是都变性了，因为一透就三天。透析之后醇沉也什么都没有，而且透析之前我还没用大孔吸附树脂去色素。
问题会不会出在多糖上，会不会苯酚硫酸测得多糖不准，粗提物中本来就没有多 ...

苯酚硫酸发实验的手法对结果测定影响较大，但不会是阴性和阳性的差别。如果有45%的含糖量，应该没有问题。
萘酚硫酸法测定时加入浓硫酸后不能震摇，只要发现液面交界处有紫色环就是阳性，不需要紫外扫描。

如果你超滤后多糖都无法检测到，你如何认为这个方法比透析好呢？透析后液体体积会增加，因此要浓缩后才能测。最简单的方法，你把超滤后样品或者透析后样品直接冻干，然后溶解后测糖含量就可以。
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