小中大分享:样品分析之色谱柱方法开发 (附图谱)领导安排检测一个业务单位送来一个样品让我们帮忙调试方法,样品名称为对羟基苯甲醛,分子式见下图,样品为类白色粉末。
首先查找相关信息:对羟基苯甲醛熔点113-118℃,相对密度1.129(30/4℃)。广泛用于医药、香料、农药、石油化工、电镀等领域.在医药工业中,主要用合成羟氨苄青霉素(阿莫西林)、抗菌增效剂甲甲氧苄胺嘧啶(TMP)、3,4,5-三甲氧基甲醛、对羟基苯酐氨酸、羟氨苄头孢霉素、人造天麻、杜鹃素、艾司洛尔等;在香料工业中用于合成香兰素、乙基香兰素、洋茉莉醛、丁香醛、茴香醛和覆盆子酮等香料;在农药中主要用作除草剂溴苯腈和羟敌草腈的合成;在化工中主要用于合成对羟基苯甲酸、对羟基甲酸苄酯、醋酸对羟基苯酚酯 ;在国外还用于生产杀菌剂、照相乳化剂、镀镍光泽剂、液晶等。
同时查找相关分析方法,文献中有气相色谱分析和液相色谱分析两种。本着方便的原因,首先考虑气相色谱分析,样品处理方便。文献中介绍用DB-5;30m*0.32mm*0.25um或者类似规格色谱柱,我们身边有一款30m*0.25mm*0.25um的色谱柱,先来试试吧。柱温在120度-200度程序升温,升温速率8度/分钟。样品先用乙醇溶解后按照文献方法分析,效果不是理想,同时调整温度和速率还是不行,因时间问题只能放弃,转而考虑液相色谱分析,将此情况向业务单位反映,同时需求他们有没有可行的方法。
业务单位提供了一个简单的分析条件,一看是液相色谱分析,与我们的想法不谋而合。分析条件:色谱柱:C18不锈钢色谱柱,流动相为甲醇和0.1%三乙胺水溶液,比例为40:60,检测波长为225nm,样品处理为甲醇溶解样品,流速1.0ml/min。
有现成的方法就比较好办了,首先依葫芦画瓢,按照以上方法处理一个样品分析一下,手边有月旭公司和其他厂家的进口的色谱柱,首先用月旭公司的色谱柱调试一下,如果不行还可以请教月旭公司的工程师,呵呵,以下是分析谱图:
从谱图上看样品有的后延,泵压达到190帕。
将流动相适当调整一下,减少甲醇的比例:
这是调整后的谱图:
效果不是很理想,看看保留时间比较长,泵压也比较高,也达到171帕,看来调整甲醇是不能彻底改变泵压偏高的问题了,将甲醇换成乙腈试试。流动相改为0.1%三乙胺:乙腈=60:40,流速1.0ml/min,系统平衡好后发现泵压降到了105帕,看来有门,上一张谱图看看:
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