小中大HPLC峰面积重现性不好
WATERS HPLC不知道出现了什么问题,峰面积重现性很不好。
用了两个样品,样品名保密,条件分别是(1)C18柱;流动相:甲醇-水 70:30;流速:1.0ml/min;室温;进样量:20微升(2)C18柱;流动相:甲醇-水-冰醋酸 40:60:0.02%;流速:1.0ml/min;室温;进样量:20微升。这两个样品的方法学已经经过确认是可以完全分离样品的。两个样品的结构不相似,分子量不大。峰形还可以的,一个略拖尾,对称因子为1.18,另一个更好一些,均没有过载现象。峰面积自动积分和手动积分RSD约为7%-10%。
上礼拜工程师来过,检查结果表明,自动进样针的进样量是准确稳定的。
另外,实验过程中,柱子的压差比较大,并且不稳定,在流速为1.0ml/min时约80psi。曾经怀疑是系统内混入了气体,但是经过长时间低流速冲洗,重现性仍然不好。系统内和柱子也没有漏液的现象。
这究竟是为什么呢???急切期待各位高人的指教!!!