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标题:[未解决]HPLC峰面积重现性不好

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
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HPLC峰面积重现性不好

WATERS HPLC不知道出现了什么问题,峰面积重现性很不好。
用了两个样品,样品名保密,条件分别是(1)C18柱;流动相:甲醇-水 70:30;流速:1.0ml/min;室温;进样量:20微升(2)C18柱;流动相:甲醇-水-冰醋酸 40:60:0.02%;流速:1.0ml/min;室温;进样量:20微升。这两个样品的方法学已经经过确认是可以完全分离样品的。两个样品的结构不相似,分子量不大。峰形还可以的,一个略拖尾,对称因子为1.18,另一个更好一些,均没有过载现象。峰面积自动积分和手动积分RSD约为7%-10%。
上礼拜工程师来过,检查结果表明,自动进样针的进样量是准确稳定的。
另外,实验过程中,柱子的压差比较大,并且不稳定,在流速为1.0ml/min时约80psi。曾经怀疑是系统内混入了气体,但是经过长时间低流速冲洗,重现性仍然不好。系统内和柱子也没有漏液的现象。
这究竟是为什么呢???急切期待各位高人的指教!!!
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  • miracle   2010-5-26 11:17  可用分  +1   已有朋友回复了。
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可能是流动相里和检测器里有汽泡,一直未冲出来,造成的吧!!把流动相重新过滤后超声30分钟,把整个系统以高流速冲洗20分钟,再试试看
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  • miracle   2010-5-26 11:17  可用分  +3   谢谢您的帮助!
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iTIANMING[使用道具]
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重现性不好是什么情况,峰面积一直减小?还是忽大忽小?

样品从结构上分析有没水解的可能?
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  • miracle   2010-5-26 11:17  可用分  +3   欢迎参与技术交流!
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朋友,柱子用了多久啦?是不是该换了
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QUOTE:
原帖由 拉菲和拉图 于 2010-5-26 00:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
WATERS HPLC不知道出现了什么问题,峰面积重现性很不好。
用了两个样品,样品名保密,条件分别是(1)C18柱;流动相:甲醇-水 70:30;流速:1.0ml/min;室温;进样量:20微升(2)C18柱;流动相:甲醇-水-冰醋酸 40:60:0.02%;流速:1.0ml/min;室温;进样量:20微 ...

有可能柱子有些堵了,否则压力不可能很大
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  • miracle   2010-5-26 11:18  可用分  +2   谢谢您的应助1
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回复 #2 sacred 的帖子

流动相的脱气没有出现问题,也在怀疑是系统内的气泡,正冲着呢,谢谢~~~
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  • miracle   2010-5-26 13:46  可用分  +2   欢迎朋友回复交流!
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回复 #3 iTIANMING 的帖子

忽大忽小的,没有什么规律……怀疑是系统内气泡,正在冲,下午再做一下重现性看看结果如何吧!其实前面用的两个样品稳定性也不错的,下午又换了一个更稳定的,但愿会好吧!
谢谢!
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回复 #4 生活eesf 的帖子

初来乍到,买新柱子不是我能决定的啊……
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回复 #5 entd_jps 的帖子

同一根柱子,用甲醇-乙腈-水为流动相,流速为1.0ml/min,柱子的压差为33psi左右,用纯甲醇,流速为1.0ml/min,柱子的压差为25psi左右,可是一换成甲醇-水和甲醇-水-冰醋酸,柱子的压差就马上变的很高了,并且在更换流动相的过程中,柱子没有动过……这是为什么呢?
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thereyoube[使用道具]
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换其他的柱子试试,看看是不是柱子问题,或者检测器的问题。还有样品是否在流动相中分解的问题。柱子压力不稳可能是泵的问题,泵头拆下超超。
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  • miracle   2010-5-26 17:26  可用分  +3   欢迎参与技术讨论!
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