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标题:【求助】纯化his-tag蛋白的镍柱可以永久性再生吗

xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2013-10-29 21:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】纯化his-tag蛋白的镍柱可以永久性再生吗

纯化his-tag蛋白的镍柱可以永久性再生吗？如果不能够，大概能够用多少次呢？

几丁质层析柱大家都是用5次就重新换填料吗？
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mod=8048[使用道具]
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发表于 2013-10-29 21:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

任何纯化填料都不可能永久再生。使用次数与柱的种类、你的样品原料性质、再生方法、操作细节习惯以及纯化的要求相关，没有确定的说法。但可以肯定的是，IDA类型的镍柱（如Chelating Sepharose FF）是比较耐用的，注意再生操作的话用个100-200次没有问题。NTA类型的镍柱在使用还原剂的条件下，镍脱落较多，再生后不能达到初始效果，使用次数要少很多很多。
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发表于 2013-10-29 21:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现在的Ni-NTA柱子都很便宜，不用太在意的。
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发表于 2013-10-29 21:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

NTA螯合四价，IDA螯合三价，NTA的稳定性要更好一些吧。
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发表于 2013-10-29 21:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现在的Ni-NTA柱子都很便宜，不用太在意的。

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是的，现在的柱子都不贵。要拿到好的结果，完全不用太在意。
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mod=8048[使用道具]
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发表于 2013-10-29 21:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
NTA螯合四价，IDA螯合三价，NTA的稳定性要更好一些吧。

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IDA不能用还原剂，NTA可以用还原剂，我说的是在用还原剂条件下的NTA和不用还原剂的IDA比较。IDA可以很方便的脱镍再生，NTA不可以。NTA脱镍后再挂镍就不耐还原剂了，NTA生产商是怎么做到挂镍后耐还原剂的，没人说。我们的版助是做填料的大师，如果不是涉及到商业秘密他早就告诉大家了。Big Smile
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发表于 2013-10-29 21:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

填料很贵啊。几丁质珠填料(279元/10ml)只能够提5次蛋白；而25ml NI-NTA都在2600元以上。
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发表于 2013-10-29 21:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

NTA的可以照分子克隆上的去再生，效果挺好，当然肯定不会是永久性的， 不过这样可以用不少次，当然得到好的实验结果更重要，改换新的就换新的。
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发表于 2013-10-29 21:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
填料很贵啊。几丁质珠填料(279元/10ml)只能够提5次蛋白；而25ml NI-NTA都在2600元以上。

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Ni-NTA的柱子GE的预装柱HisTrap FF 1 mlX5也就$130，我一年多用了两个，效果还非常好的。

Chitin的填料没用过。
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发表于 2013-10-29 22:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
IDA不能用还原剂，NTA可以用还原剂，我说的是在用还原剂条件下的NTA和不用还原剂的IDA比较。IDA可以很方便的脱镍再生，NTA不可以。NTA脱镍后再挂镍就不耐还原剂了，NTA生产商是怎么做到挂镍后耐还原剂的，没人说。我们的版助是做填料的大师，如果不是涉及到商业秘密他早就告诉大家了。Big Smile

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请问如果两者都是在不用还原剂的条件下哪个更稳定呢？谢谢
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