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标题:【求助】Western blot压片后经常在某一特定区域有一空白区域

131415[使用道具]
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【求助】Western blot压片后经常在某一特定区域有一空白区域


最近做Western blot,用的是化学发光法,压片后经常在某一特定区域有一空白区域(具体请看图片),请帮忙分析一下原因吧,非常感谢!


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2013-10-31 17:26
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sunnyB[使用道具]
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ecl显影液涂抹均匀了吗?你放暗盒的桌面平整吗?
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QUOTE:
原帖由 sunnyB 于 2013-10-31 17:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

ecl显影液涂抹均匀了吗?你放暗盒的桌面平整吗?

显影液涂均匀了,之前做别的蛋白都是在哪一个地方做的,桌面应该没问题的
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caihong[使用道具]
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有时也碰到这种问题,同关注
难道是一抗孵育时液面没有完全没过膜?
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fsdd817[使用道具]
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什么显影液,怎么孵育的抗体,可能是ECL的问题,你是把膜放在哪里显影,是PE手套还是玻璃纸
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QUOTE:
原帖由 fsdd817 于 2013-10-31 17:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
什么显影液,怎么孵育的抗体,可能是ECL的问题,你是把膜放在哪里显影,是PE手套还是玻璃纸

santa cruz的显影液和抗体,一抗置于平皿中,摇动孵育2小时,二抗1小时,显影时膜放在PE手套中,也试过保鲜膜。
请指教!谢谢!
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dongdongqiang[使用道具]
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会不会是膜干燥了。我今天做的时候因为怕ECL液污染,所以稍微晾干了一下,结果就出现这样了。因为膜风干后,表面结合的二抗也会脱落。这样的话可能就出现这种情况了。
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这个ECL的问题可能性大些,和ECL的特异性,灵敏度以及稳定性有关系,还有原因就是你的一抗或者二抗浓度高了,有些ECL 是超敏的,如果是超敏的ECL就不好手动曝光,可以选择机器曝光,建议排除了抗体孵育不均匀的原因再找ECL的问题,同时换ECL以及调整抗体浓度,二抗我一般用1:10000以上,
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avi317[使用道具]
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更感兴趣的是LZ这样的图可以用于结果处理分析吗
我的条带和LZ类似 不知道怎么处理
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当然不能,我只是为了让大家更容易明白我说的问题,特意做了一张曝光时间特别长的片子,曝光时间短的片子特异性条带还是挺明显的,就是右边缺一块,郁闷之极!
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