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标题:【讨论帖】大家来谈谈包涵体复性问题

boom[使用道具]
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发表于 2013-10-31 21:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】大家来谈谈包涵体复性问题


复性好的蛋白透析更换缓冲液时，大部分蛋白都析出是啥原因？
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sunshine039[使用道具]
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发表于 2013-10-31 21:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白局部聚集，形成了聚集体，会出现这样的情况
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uuooii[使用道具]
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发表于 2013-10-31 21:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这说明蛋白复性得不好，没有形成其天然构像。
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any333[使用道具]
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发表于 2013-10-31 21:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的透析液盐浓度太低会导致蛋白析出
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feima+[使用道具]
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发表于 2013-10-31 21:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最好告诉复性液的情况，可能更便于分析，目前两种可能都有；复性不好，透析液不利于目标蛋白的溶解。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2013-10-31 21:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
包含体复性三大原则：
1。低浓度
2。平缓梯度
3。低温

有蛋白析出最大的可能型是：蛋白浓度太高，建议你稀释以后再作透析。
此外，透析的盐浓度（比如ura）要平缓降低：8m-6m-4m-2m-pbs-H2O。
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2013-10-31 21:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果蛋白本身含有较多的Cys,通常还需要在透析液中加入DTT或BME等还原剂,
防止S-S的错配.
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one[使用道具]
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发表于 2013-10-31 21:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

复性好的蛋白在更换缓冲液时，蛋白析出。我认为：
1、蛋白在该缓冲液中不稳定。
2、蛋白在该pH值的缓冲液中不稳定。
应该优化选择合适的缓冲液及pH值
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c86v[使用道具]
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发表于 2013-10-31 21:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果蛋白本身含有较多的Cys,通常还需要在透析液中加入DTT或BME等还原剂,
防止S-S的错配.

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我认为复性好的蛋白形成的应该是正确的二硫键，透析时不需要加还原剂。
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caihong[使用道具]
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发表于 2013-10-31 21:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问大家在复性方面有没有比较经典的指导文献？最好是全面的综述，贴出来让我这个初学者参考参考，谢谢！
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