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标题:【求助】溴酚蓝的问题

sunnyB[使用道具]
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发表于 2013-11-5 23:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】溴酚蓝的问题


大家好，我是那个不能毕业，要死要活的硕士研究生，在大家的帮助下，我的考染图得到了突破性的进步，但是同时又一个新的问题产生了，就是溴酚蓝指示剂，之前跑SDS-PAGE二相时，溴酚蓝指示剂都是一条很清晰的线，但是最近三次溴酚蓝指示剂都是这样弥散的，隐约形成一条线，在图像上的反应就是，大分子量蛋白有拖尾和重叠，可是我的缓冲液每次都是按照操作说明现配现用的，看帖子说如果有重叠和拖尾可能是Tris有问题，但是我这个问题在图像上反应的也不是特别明显，到底是什么原因造成溴酚蓝弥散呢？
下图为正常的溴酚蓝直线图：


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 小中大
下图为最近三次SDS-PAGE时的溴酚蓝弥散图：


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 小中大
下图为最近三次SDS-PAGE时的溴酚蓝弥散图：


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发表于 2013-11-5 23:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
以前在哪看见说条带有弥散现象是电泳过快和电压多大引起的。
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 小中大
1w/gel，1h，15w/gel，3h，基本上每次都这样跑下来的，电压下次再注意看看
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发表于 2013-11-5 23:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们用的是恒压，100V，1h,200v,跑到离玻璃板边缘1cm处，停止
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发表于 2013-11-5 23:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最好不要用W来进行衡量，应该用电压或者电流，因为你跑的胶数目的不同，功率会不一样的
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发表于 2013-11-5 23:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
染色后蛋白条带有影响不?如果没影响就别管它
如果有影响,很可能是配胶的缓冲体系有问题,感觉浓缩胶没起到作用.
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发表于 2013-11-5 23:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
染色后蛋白条带有影响不?如果没影响就别管它
如果有影响,很可能是配胶的缓冲体系有问题,感觉浓缩胶没起到作用.

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没有浓缩胶，直接跑的是分离胶
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2013-11-5 23:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最好不要用W来进行衡量，应该用电压或者电流，因为你跑的胶数目的不同，功率会不一样的

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其实以前用的GE的旧二相时，是像你这样用电流和电压来控制的，但是工程师说这个仪器就应该控制W，而且最近摸条件也的确是只跑的一块胶
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