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标题:【求助】二抗用荧光二抗图怎么看啊？

leifengta[使用道具]
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发表于 2013-11-9 23:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】二抗用荧光二抗图怎么看啊？

这几天做wb二抗用的是荧光二抗，用红外荧光成像系统照相，照的图像就和蛋白胶一样，怎么看啊？谢谢各位高手指点


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2013-11-9 23:58
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2013-11-9 23:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 leifengta 于 2013-11-9 23:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
这几天做wb二抗用的是荧光二抗，用红外荧光成像系统照相，照的图像就和蛋白胶一样，怎么看啊？谢谢各位高手指点  

楼主的图像，条带还可以。
用红外荧光成像系统照相，照的图像就和蛋白胶一样，怎么看啊？
楼主可能是刚开始用红外荧光成像系统照相，还不熟悉该软件。
你可以调成灰度，之后可以调节其强度，这样你就可以分析了。

照的图像就和蛋白胶一样，你指的是图中发白的部分？
这个是由于你扫描的时候强度太大所致，可以调小扫描时的激光强度。自然就可以了。
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leifengta[使用道具]
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发表于 2013-11-9 23:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 ritou1985 的帖子

谢谢指点。我还有个疑问，marker条带不应该发荧光，因为它没与荧光二抗接触啊，可是我们看到的marker条带是怎么一回事啊
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ending[使用道具]
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发表于 2013-11-10 00:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Marker是可以发荧光的。我用的Marker大多条带在红色荧光时很清楚，三条带在绿色荧光时很清楚。如果显示不了ＭＡＲＫＥＲ，那你的ＭＡＲＫＥＲ就没有什么作用了。
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2013-11-10 00:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
marker是预染的
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jiushikeshui371[使用道具]
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发表于 2013-11-10 00:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

调整一抗、二抗浓度
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bluelake[使用道具]
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发表于 2013-11-10 00:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

求助做400Kd的蛋白，分离胶应选择的浓度，电泳时间，转膜时间，以及该如何选择内参？谢谢
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2013-11-10 00:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
内参选择和其他低分子量的蛋白没什么区别，GAPDH　B－ACTIN　B－TUBLIN都可以的；转膜时间上，这么大的分子倒没做过，118KD的蛋白300MA至少要转两个半小时，你顺理推算一下摸索摸索吧，电泳时胶浓度也要摸索，肯定要用8%的分离胶，时间也要摸索，呵呵　加个MARKER看看就知道了。　实践了真知，祝实验顺利
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ii077345[使用道具]
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发表于 2013-11-10 00:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也准备用荧光标记的二抗做western，能请教您一下试验方法吗？和一般的western方法是一样的吗？谢谢
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